探讨动力相关蛋白-1(DRP-1)对糖皮质激素诱导的胰岛β细胞凋亡的影响。
方法采用地塞米松(Dex)处理大鼠胰岛β细胞系INS-1细胞，通过亚G1(Sub-G1)法检测细胞凋亡，Western blotting检测DRP-1的表达。利用四环素诱导表达系统在INS-1细胞构建可诱导表达野生型DRP-1(DRP-1 wt)基因和突变型DRP-1(DRP-1 k38A)基因的稳转细胞系，并用细胞免疫荧光和Western blotting验证强力霉素(Dox)对转染基因的可诱导性。采用TUNEL法分析在Dex处理情况下，DRP-1 wt基因或DRP-1 k38A基因表达对Dex诱导的胰岛β细胞凋亡的影响，并同时测定相应细胞凋亡蛋白酶Caspase-3活性及细胞内活性氧(ROS)的变化情况。多组间均数比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用t检验。
结果不同浓度Dex处理组细胞凋亡率[(15.7±4.2)%、(30.4±3.3)%、(61.6±5.4)%]明显高于未处理组[(3.3±1.3)%，t＝6.44、14.07、30.26，均P<0.05]；200 nmol/L Dex处理24、48及96 h后细胞凋亡率[(10.6±1.2)%、(15.1±4.6)%、(42.6±9.8)%]明显高于处理0 h组[(2.4±1.3)%，t＝2.99、4.63、14.66，均P<0.05]。Western blotting显示Dex可诱导胰岛β细胞DRP-1基因的表达。DRP-1 wt基因表达能够显著促进Dex诱导的β细胞凋亡[ (53.8±7.2)%比(16.2±3.2)%，t＝10.02，P<0.05]，而DRP-1 k38A基因表达反而抑制Dex诱导的β细胞凋亡[(6.2±1.1)%比(14.5±1.8)%，t＝10.63，P<0.05]。DRP-1 wt基因表达能够促进Dex诱导的caspase-3活化[(1979±132)比(921±182)，t＝11.13，P<0.05]及ROS产生[(772±62)比(290±56)，t＝13.66，P<0.05]，而DRP-1 k38A基因表达反而抑制了Dex诱导的caspase-3活化[(506±47)比(681±44)，t＝5.25，P<0.05]及ROS产生[(235±14)比(309±44)，t＝3.86，P<0.05]。
结论DRP-1参与了糖皮质激素诱导的胰岛β细胞凋亡。