为了更准确、简便而又快速地了解乙型肝炎表面抗原（HBsAg）阴性肝病患者的病因，建立了套式和免疫套式聚合酶链反应（PCR）检测血清中乙型肝炎病毒（HBV）DNA的技术，结合丙型肝炎病毒（HCV）感染指标的检测，对HBsAg阴性肝病患者的病因进行了研究。发现套式PCR能将单次PCR的敏感性稳定地提高1000倍；免疫套式PCR可检测到0.1～0.01pg/L水平。检测HBsAg阴性肝硬化22例（A组）、HBsAg阴性慢性肝炎13例（B组）、HBsAg阴性和乙型肝炎病毒核心抗体（抗-HBc）阳性正常对照组30例（C组）及HBsAg（+）/HBeAg（-）肝硬化患者12例（D组），分别有45.5％、30.8％、13.3％和100％患者血清中HBVDNA阳性。HBVDNA在一些抗-HBs（+）肝病患者和所谓健康人的血清中也存在。A、B两组检出有HBV和（或）HCV感染患者分别占81.8％和53.8％。提示套式和免疫套式PCR是简便、快速而又高度敏感的检测方法；HBV感染可能是引起HBsAg阴性慢性肝病的重要原因，且HBsAg阴性肝病病因大多与病毒感染有关；应该重新认识自然感染者血清中抗-HBs的临床意义。