【摘 要】
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目的 采用基因表达连续分析技术(serial analysis of gene expression,SAGE)建立肝癌HepG2细胞标签文库.方法 提取肝癌HepG2细胞总RNA,分离纯化得到mRNA,利用改进后的M-MLV R
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目的 采用基因表达连续分析技术(serial analysis of gene expression,SAGE)建立肝癌HepG2细胞标签文库.方法 提取肝癌HepG2细胞总RNA,分离纯化得到mRNA,利用改进后的M-MLV RTasecDNA合成试剂盒合成生物素标记的双链cDNA;得到全长cDNA后,根据SAGE技术流程后续步骤,建立肝癌HepG2细胞标签文库.结合GenBank、UniGene文库分析标签代表的转录本,最终通过SAGE软件分析标签丰度.结果 15 586个标签中有14 181个获得稳定有效的扩增,长度在200～3000 bp.将获得的长片段进行序列分析后,2023个特异基因被发现.结论 用改进后的逆转录试剂盒可以较好地获得全长cDNA,为SAGE技术构建文库提供可靠的原料.借助SAGE技术建立的肝癌HepG2细胞标签文库,容量大、效率高,为后续基因研究搭建了良好的平台.
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