【摘 要】
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目的 将人外周血单个核细胞体外扩增为自然杀伤（NK）细胞,与肝癌细胞1:1共培养。观察柚皮素对NK细胞杀伤率的影响并初步研究相关机制。方法 淋巴细胞分离液分离人外周血单个核细胞,在体外经重组人白细胞介素2诱导培养NK细胞;0、3.125、6.25、12.5、25、50μmol/L浓度柚皮素作用于人肝癌细胞0、24、48 h后CCK8检测肝癌细胞增殖情况;不同浓度柚皮素作用于人NK细胞24 h后,C
【基金项目】
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国家自然科学基金面上项目（81874436）； 国家“艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治”科技重大专项（2018ZX10725504）； 国家自然科学基金青年项目（81904117）；
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目的 将人外周血单个核细胞体外扩增为自然杀伤（NK）细胞,与肝癌细胞1:1共培养。观察柚皮素对NK细胞杀伤率的影响并初步研究相关机制。方法 淋巴细胞分离液分离人外周血单个核细胞,在体外经重组人白细胞介素2诱导培养NK细胞;0、3.125、6.25、12.5、25、50μmol/L浓度柚皮素作用于人肝癌细胞0、24、48 h后CCK8检测肝癌细胞增殖情况;不同浓度柚皮素作用于人NK细胞24 h后,CCK8检测NK细胞增殖情况;柚皮素作用于NK-肝癌细胞1:1共培养体系24 h后,CellTiter-LumiTM检测NK细胞杀伤率;实时荧光定量PCR法检测NK细胞中激活型受体NKG2D的基因表达,以及肝癌细胞中NKG2D配体的基因表达。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果 经重组人白细胞介素2诱导培养后,NK细胞可扩增至人外周血单个核细胞的82.33%±0.70%;柚皮素作用24 h后,所有质量浓度组CLC5肝癌细胞的增殖率无明显差异（P值均>0.05）,25及50μmol/L质量浓度组柚皮素对NK细胞的增殖有较明显的促进作用（P值均<0.000 1）;柚皮素作用NK-肝癌细胞1:1共培养体系24 h后,25及50μmol/L浓度组对NK细胞杀伤率均有明显提高（P值均<0.000 1）;柚皮素作用于NK-肝癌细胞1:1共培养体系24 h后,25、50μmol/L质量浓度组柚皮素对NK细胞中NKG2D的表达均无影响,对肝癌细胞中MICB、ULBP2的表达亦无影响（P值均>0.05）,对肝癌细胞中ULBP1、ULBP3等NKG2D配体的表达有明显上调作用（P值均<0.001）。结论 柚皮素可能通过上调肝癌细胞中NKG2D配体表达,从而增加NK细胞的杀伤活性。
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