目的:研究3种二线抗结核药血药浓度的测定方法及其影响因素,探索其与结核菌转阴相关性,为合理用药提供参考。方法:对257例结核病患者服用莫西沙星（123例）、利奈唑胺（80例）、氯法齐明（54例）后2 h的血药浓度进行监测。样品用乙腈提纯,采用高效液相-质谱联用法测定。色谱条件:Shimadzu ODS-C18色谱柱（100 mm×2.0 mm,2.2μm）,以0.1%甲酸-10 mmol·mL-1甲酸铵-水溶液（A）和50%甲醇-50%乙腈-0.1%甲酸溶液（B）作为流动相,进行梯度洗脱。质谱条件:正离子模式下的电喷雾（ESI）离子源,喷雾电压5 kV,离子源温度500℃,MRM模式。并采集相关的人口学特征、实验室数据,对相关性和影响因素进行回顾性分析。结果:该方法日内、日间的准确度、精密度（RSD均小于13.2%）、线性（r均高于0.997 0）、回收率和稳定性都在可接受范围内。男性（χ~2=-4.565,P=0.033）、30～49岁（χ~2=11.918,P=0.003）、内生肌酐清除率较低（t=2.352,P=0.020）、复治患者（χ~2=6.276,P=0.012）、吸烟史（χ~2=5.826,P=0.016）、耐多药（χ~2=8.162,P=0.004）和利奈唑胺2 h血药浓度偏低（t=2.033,P=0.046）是结核菌培养转阴时间更长的相关因素。莫西沙星组中女性的血药浓度更高（P=0.044）,血清白蛋白和血药浓度之间有负相关性（P=0.035）;利奈唑胺组中,单位给药剂量越大,血药浓度越高（P<0.001）,而内生肌酐清除率和血药浓度之间有负相关性（P=0.024）;氯法齐明2 h血药浓度没有明显的影响因素。结论:本方法可以同时、方便、快捷地测出3种二线抗结核药的血药浓度。利奈唑胺的2 h血药浓度偏低与结核菌培养转阴时间长有关,应关注其单位给药剂量和肌酐清除率,从而实现个体化给药。