为建立一种同时检测牛轮状病毒(BRV)和牛冠状病毒(BCV)的方法,本研究根据GenBank中登录的BRV VP6基因保守序列和BCVN基因保守序列设计引物和探针,通过方阵法优化体系后,建立了一种可以同时检测BRV和BCV的双重TaqMan荧光定量PCR方法.该方法与牛病毒性腹泻病毒、牛细小病毒、牛肠道病毒、牛传染性鼻气管炎病毒均无交叉反应,特异性强;敏感性试验结果显示,该方法对BRV和BCV重组质粒标准品的最低检测限分别为41.8拷贝/μL和3.55拷贝/μL,敏感性高;组内和组间变异系数均小于2％,表明该方法重复性较好.利用建立的该方法对本实验室于2019年3月～9月在河北省内采集的72份牛腹泻粪便样品进行检测,结果显示BRV的阳性率为50.0％(36/72),BCV的阳性率为75.0％(54/72),BRV和BCV共感染率为33.3％(24/72);而常规PCR的上述检测结果分别为47.2％(34/72)、70.8％(51/72),共感染率为29.1％(22/72),二者对BRV和BCV检测结果的阳性符合率分别为97.2％、96.8％,表明该方法可以用于临床样品的检测.本研究建立的双重TaqMan荧光定量PCR方法对BRV和BCV的检测和流行病学调查具有重要意义.