iNOS基因转染人CD3AK细胞的实验研究

来源 :中国肿瘤临床与康复 | 被引量 : 0次 | 上传用户：nickyhuang00

【摘要】

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目的构建一氧化氮供体CD3AK/iNOS细胞.方法用PCR技术从pCMV/iNOS质粒中扩增出iNOS全长cDNA,与逆转录病毒pLNCX构建重组质粒pLNCX/iNOS;通过脂质体介导把重组质粒转染入包装细

【作者】

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朱梁军陈宝安朱敏生潘英杜娟

【机构】

：

江苏省肿瘤医院内科,东南大学附属中大医院血液科,南京军事医学科学研究所

【出处】

：

中国肿瘤临床与康复

【发表日期】

：

2002年6期

【关键词】

：

实验研究一氧化氮合酶逆转录病毒基因转染 CD3AK细胞 nitric oxide synthase retroviral vector gene tran

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目的构建一氧化氮供体CD3AK/iNOS细胞.方法用PCR技术从pCMV/iNOS质粒中扩增出iNOS全长cDNA,与逆转录病毒pLNCX构建重组质粒pLNCX/iNOS;通过脂质体介导把重组质粒转染入包装细胞PA317中,经G418筛选出抗性克隆.通过NIH3T3细胞测定病毒滴度.用病毒上清感染人CD3AK细胞.测定CD3AK/iNOS细胞培养上清中NO含量及iNOS活性.结果经过酶切分析和核苷酸序列分析鉴定重组质粒的正确性.G418筛选出16个抗性克隆,能稳定合成并分泌重组逆转录病毒颗粒.NIH3T3

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