【摘 要】
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目的获得中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)的单克隆抗体,并对其应用于化学发光定量试剂进行研究。方法利用原核表达系统表达的NGAL重组抗原,经过Ni2+-金属螯合层析纯
【机 构】
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厦门大学分子疫苗学与分子诊断学国家重点实验室公共卫生学院; 厦门万泰凯瑞生物技术有限公司; 厦门大学国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心生命科学学院;
【基金项目】
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国家高技术研究发展计划(863计划,2011AA02A101)
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目的获得中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)的单克隆抗体,并对其应用于化学发光定量试剂进行研究。方法利用原核表达系统表达的NGAL重组抗原,经过Ni2+-金属螯合层析纯化后用于免疫6~8周龄的雌性BALB/c小鼠,完成免疫程序后将其脾脏细胞与杂交瘤细胞进行融合,通过间接法ELISA筛选抗NGAL的单克隆抗体,并结合Western blot鉴定抗体与天然NGAL的反应性。结果获得了由原核表达系统表达的NGAL重组抗原,具有较高的纯度,可形成二硫键交联的二聚体形式;重组抗原具有较好的免疫原性,免疫小鼠多抗血清效价达106以上;筛选获得30株单克隆抗体,其中单抗23C12、38D10的EC50分别为0.034、0.022 g/mL;经NGAL标准品及临床尿液样本初步筛选,由38D10/23C12-SAE组成的抗体配对能够很好的适用于基于化学法发光的免疫反应定量检测试剂的开发;尿液阳性样本与阴性样本检测结果显示具有显著的统计学差异(P<0.001);对病患组定量结果与Abbott公司的尿NGAL测定试剂盒(化学发光微粒子免疫检测法)的相关系数大于0.97,线性范围为10~1500 ng/mL,检测灵敏度为0.63 ng/mL。结论本研究成功制备了NGAL重组抗原,获得了NGAL特异单克隆抗体,并开发了NGAL化学发光免疫定量试剂,该试剂检测能力与国际主流试剂相当。
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