【摘 要】
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目的为了探讨巴德特-别德尔综合征(BBS)蛋白在纤毛信号传导中的作用,本文研究了莱茵衣藻BBS4蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体制备。方法利用莱茵衣藻bbs4基因的cDNA序列构
【机 构】
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省部共建食品营养与安全国家重点实验室天津科技大学食品工程与生物技术学院; 天津科技大学大健康生物技术研究所; 天津科技大学海洋与环境学院;
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目的为了探讨巴德特-别德尔综合征(BBS)蛋白在纤毛信号传导中的作用,本文研究了莱茵衣藻BBS4蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体制备。方法利用莱茵衣藻bbs4基因的cDNA序列构建原核表达载体pET-28a(+)-bbs4和pMAL-c2X-bbs4,转入大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)后,诱导表达得到带有麦芽糖结合蛋白(MBP)和6×His标签的融合蛋白,用纯化后的带有6×His标签的融合蛋白免疫新西兰白兔,经耳源静脉采血,分离得到抗血清,间接ELISA法测得抗血清的效价,Western印迹法和免疫荧光实验对所制备抗体的特异性进行检测。结果成功构建了原核表达质粒pET-28a(+)-bbs4和pMAL-c2X-bbs4。6×His-BBS4和MBP-BBS4融合蛋白的相对分子质量分别为4.5×104和8.5×104,经纯化后得到纯度>85%、浓度>0.5 mg/ml的目的蛋白用于免疫,测定效价为51 200,经Western印迹法对C. reinhardtii CC-125检测有较高的特异性,实现了莱茵衣藻BBS4蛋白的原核表达和多克隆抗体的制备。结论成功制备了莱茵衣藻BBS4的多克隆抗体,为BBS4在纤毛病中作用的深入研究奠定了基础。
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