【摘 要】
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目的 探讨上调基因-4(URG-4)对结肠癌细胞增殖的影响.方法 筛选高表达URG-4的结肠癌细胞.构建URG-4基因siRNA的逆转录病毒载体及阴性对照,经PT67细胞包装后,获得可表达人URG-
【机 构】
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第三军医大学西南医院全军普通外科中心
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目的 探讨上调基因-4(URG-4)对结肠癌细胞增殖的影响.方法 筛选高表达URG-4的结肠癌细胞.构建URG-4基因siRNA的逆转录病毒载体及阴性对照,经PT67细胞包装后,获得可表达人URG-4基因siRNA逆转录病毒及阴性对照.RT-PCR和Western blot法检测MKN45、SW480、LoVo、HCT116、HT29细胞中URG-4 mRNA和蛋白表达水平,筛选稳定转染细胞株.分别使用重组病毒(干扰组)、原始病毒(阴性对照组)和等量PBS(空白对照组)转染结肠癌LoVo细胞.MTT法检测各组结肠癌LoVo细胞生长情况.计量资料比较采用单因素方差分析和t检验.结果 测序结果证实表达siRNA的逆转录病毒成功构建.URG-4 mRNA在MKN45、SW480、LoVo、HCT116和HT29细胞中的相对表达量分别为0.58±0.02、0.63 +0.03、0.81±0.01、1.01±0.02和0.91±0.04；URG-4蛋白相对表达量分别为0.73±0.02、0.85士0.03、1.42 +0.01、0.80 +0.03和0.80+0.04.结肠癌LoVo细胞高表达URG-4.干扰组中URG-4 mRNA表达为0.55±0.03,显著低于阴性对照组的1.15±0.02和空白对照组的1.15±0.01(t=-5.179,-9.285,P＜0.05).干扰组URG-4 mRNA的抑制率为52.6％.干扰组中URG-4蛋白表达为0.82 +0.05,显著低于阴性对照组的1.46士0.07和空白对照组的1.54 ±0.04(t=-4.239,-3.704,P＜0.05).干扰组URG-4蛋白的抑制率为43.6％.各组结肠癌LoVo细胞呈指数生长.与阴性对照组比较,第3～6天干扰组细胞增殖受到明显抑制,差异有统计学意义(t=-6.436,-6.045,-6.434,-4.285,P＜0.05).结论 干扰URG-4表达能够抑制LoVo细胞的生长.
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