家蝇防御素在大肠杆菌中的表达、纯化与抗体制备

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家蝇防御素是从家蝇中克隆得到的1种抗菌肽.为了进一步研究家蝇防御素的功能和制备特异性抗体,采用大肠杆菌表达外源蛋白的方法,进行了家蝇防御素原核表达的研究.根据克隆到的家蝇防御素基因(Mdde)的cDNA序列,设计特异性引物,PCR扩增成熟肽的cDNA片段,将成熟肽序列重组到表达载体pGEX-4T-1中,构建m-Mdde/pGEX-4T-1重组表达载体,在大肠杆菌BL21中诱导表达,重组表达的融合蛋白GST-Mdde占菌体总蛋白的33.4%.纯化得到GST-Mdde后,再用凝血酶将其从特定位点切开,得到表达
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