【摘 要】
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目的:探讨β-淀粉样蛋白(amyloid β peptide,Aβ)对阿尔茨海默病(Alzheimer\'s disease,AD)模型小鼠脑神经元及小胶质细胞内溶酶体的影响.方法:取6月龄APP/PS1双转基因AD模型小鼠和同窝野生型小鼠各6只,免疫荧光染色观察脑内神经元和小胶质细胞表达以及和溶酶体共表达情况;Western blot检测小鼠脑内自噬相关蛋白表达.用Aβ25-35处理SH-SY5Y细胞后,转录因子EB(transcription factor EB,TFEB)过表达腺病毒干预细胞72
【机 构】
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重庆医科大学实验教学管理中心,重庆400016;重庆医科大学人体解剖学教研室、神经科学研究中心,重庆400016
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目的:探讨β-淀粉样蛋白(amyloid β peptide,Aβ)对阿尔茨海默病(Alzheimer\'s disease,AD)模型小鼠脑神经元及小胶质细胞内溶酶体的影响.方法:取6月龄APP/PS1双转基因AD模型小鼠和同窝野生型小鼠各6只,免疫荧光染色观察脑内神经元和小胶质细胞表达以及和溶酶体共表达情况;Western blot检测小鼠脑内自噬相关蛋白表达.用Aβ25-35处理SH-SY5Y细胞后,转录因子EB(transcription factor EB,TFEB)过表达腺病毒干预细胞72 h,Western blot检测TFEB和溶酶体标志物水平.结果:与野生型组小鼠比较,6月龄AD转基因组小鼠LC3、p62蛋白表达增加(t=4.976,P=0.008;t=4.463,P=0.011),溶酶体标志蛋白LAMP1明显减少(t=14.91,P=0.0001).AD模型组小鼠海马区神经元明显丢失,小胶质细胞明显增生,溶酶体表达均明显减少.与野生型组小鼠比较,AD转基因组小鼠磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mammalian target of rapamycin,p-mTOR)/mTOR蛋白表达量明显升高(t=5.501,P=-0.005),TFEB蛋白表达水平明显降低(t=5.899,P=0.004).Aβ25-35处理使SH-SY5Y细胞TFEB和Lamp1蛋白水平均下调(t=10.94,P＜0.001;t=17.22,P＜0.001),过表达TFEB后,溶酶体标志物Lamp1蛋白水平明显升高(t=5.136,P＜0.01).结论:Aβ引起AD转基因小鼠脑内神经元和小胶质细胞内溶酶体均减少,可能通过抑制mTOR/TFEB信号通路发挥作用.
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