【摘 要】
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目的 构建人胆固醇酯水解酶(hCEH)绿色荧光蛋白真核表达载体pEGFP-N1-hCEH,并观察其转染单核巨噬细胞株U937后,细胞中hCEH的表达情况.方法 以人肝细胞L-02总RNA为模板,采用RT
【机 构】
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辽宁医学院附属第一医院,辽宁,锦州,121001
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目的 构建人胆固醇酯水解酶(hCEH)绿色荧光蛋白真核表达载体pEGFP-N1-hCEH,并观察其转染单核巨噬细胞株U937后,细胞中hCEH的表达情况.方法 以人肝细胞L-02总RNA为模板,采用RT-PCR技术扩增hCEH编码区序列,将扩增片段插入到pMD19-T载体中,回收、纯化目的 片段后亚克隆到pEGFP-Nl真核表达载体上,经双酶切、测序鉴定后,转染U937,观察U937中绿色荧光蛋白的表达情况.结果 RT-PCR扩增hCEH基因的编码区序列获得1条约1.7kb的片段,与预期片段大小相符;以pEGFP-Nl为载体,成功构建重组表达质粒pEGFP-Nl-hCEH,该质粒可以在U937中表达.结论 成功构建pEGFP-N1-hCEH,用其转染U937后,细胞中pEGFP-Nl-hCEH大量表达.
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