【摘 要】
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背景与目的:香烟烟雾可以致多种细胞发生DNA损伤已有报道证实.本研究旨在进一步阐明香烟烟雾提取物(cigarette smoke extract,CSE)作用于正常人类支气管上皮细胞系(normal hu
【机 构】
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华中科技大学同济医学院附属同济医院分子医学中心肿瘤研究所,华中科技大学同济医学院附属协和医院肿瘤中心,华中科技大学同济医学院附属同济医院肿瘤科
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背景与目的:香烟烟雾可以致多种细胞发生DNA损伤已有报道证实.本研究旨在进一步阐明香烟烟雾提取物(cigarette smoke extract,CSE)作用于正常人类支气管上皮细胞系(normal human bronchial epithelial ceHs,NHBE)和肺腺癌细胞系SPC-A1后引起的DNA损伤和凋亡情况.方法:不同浓度的CSE作用于NHBE和SPC-A1细胞,用四甲基偶氮唑盐比色法(MTF)检测两种细胞活性.荧光标记的磷酸化H2AX组蛋白(γ-H2AX)抗体特异性标记细胞核内DNA双链断裂(DNAdouble-strand breaks,DSBs)处的γ-H2AX,然后用流式细胞仪定量检测并分析DNA损伤.用免疫印迹检测γ-H2AX表达.同时,亚G1峰法(Sub G1 peak)和Annexin V-FITC/碘化丙啶双染色流式细胞术检测CSE诱导的细胞凋亡.用激光共聚焦显微镜观察细胞损伤和凋亡形态学变化.结果:MTF结果显示,随CSE浓度和作用时间增加,细胞活性均逐渐降低.CSE可引起细胞DNA双链断裂,γ-H2AX最大值在作用后4 h左右,然后逐渐降低.DNA损伤后平均12 h可以出现凋亡.另外,激光共聚焦显微镜观察到两种细胞内的γ-H2AX量在细胞受到CSE刺激后快速大量的积聚,呈现典型细胞损伤的形态学变化,较为明显的凋亡形态学特征4 h后方可出现.结论:CSE能直接引起NHBE和SPC-A1细胞的DNA损伤和凋亡,且存在着浓度和时间依赖关系.
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