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摘要 ：为了筛选对梨瘿蚊幼虫具有高毒性并对天敌异色瓢虫安全的杀虫剂，采用浸渍法测定了7种杀虫剂对梨瘿蚊幼虫的毒力;采用滤纸接触法测定了7种杀虫剂对天敌异色瓢虫1龄幼虫和成虫的毒力，并评价这些药剂对异色瓢虫的安全性。结果表明，药剂处理48 h后对梨瘿蚊幼虫毒力从大到小依次为2.5%高效氯氟氰菊酯EW（5.540 mg/L）>5%氯虫苯甲酰胺SC（10.015 mg/L）>60 g/L乙基多杀菌素SC（33.224 mg/L）>2.2%甲氨基阿维菌素苯甲酸盐ME（214.644 mg/L）>45%毒死蜱EC（231.876 mg/L）>150 g/L茚虫威EC（401.490 mg/L）>10%虫螨腈SC（404.147 mg/L）。药剂处理24 h后，7种杀虫剂对天敌异色瓢虫1龄幼虫和成虫的毒力测定结果基本一致，60 g/L乙基多杀菌素SC毒力最低，2.2%甲氨基阿维菌素苯甲酸盐ME、2.5%高效氯氟氰菊EW和45%毒死蜱EC的毒力均高于其他4种杀虫剂。结合益害毒性比和安全系数，5%氯虫苯甲酰胺SC和60 g/L乙基多杀菌素SC对梨瘿蚊毒力高而对异色瓢虫毒力低，适合应用于梨瘿蚊的化学防治和生物防治相结合的防治策略。
关键词 ：杀虫剂; 梨瘿蚊; 异色瓢虫; 毒力; 安全性评价
中图分类号：
S 482.3
文獻标识码： B
DOI： 10.16688/j.zwbh.2020016
Toxicity of seven insecticides on Dasineura pyri and safety
evaluation to predator Harmonia axyridis
TENG Haiyuan， ZHANG Tianshu， CHANG Xiaoli， GU Haotian， WANG Dongsheng*， YUAN Yongda*
（Eco-Environmental Protection Research Institute， Shanghai Academy of Agricultural Sciences， Shanghai 201403， China）
Abstract
In order to screen insecticides with high toxicity to Dasineura pyri and safety to its natural enemy Harmonia axyridis， toxicities of seven insecticides to D.pyri and H.axyridis were evaluated by dipping method and filter paper contact test， respectively. The results showed that after treatment on D.pyri larvae for 48 h， the median lethal concentrations （LC50） values ranked as lambda-cyhalothrin 2.5% EW （5.540 mg/L）>chlorantraniliprole 5% SC （10.015 mg/L）>spinetoram 60 g/L SC （33.224 mg/L）>emamectin benzoate 2.2% ME （214.644 mg/L）>chlorpyrifos 45% EC （231.876 mg/L）>indoxacarb 150 g/L EC （401.490 mg/L）>chlorfenapyr 10% SC （404.147 mg/L）. After treatment for 24 h， the toxicities of seven insecticides to the 1st instar larvae of H.axyridis were consistent with those to the adults of H.axyridis， spinetoram 60 g/L SC was the lowest， emamectin benzoate 2.2% ME， lambda-cyhalothrin 2.5% EW and chlorpyrifos 45% EC were more toxic than the other four insecticides. Overall， taken both the toxicity ratio and safety coefficient into account， chlorantraniliprole 5% SC and spinetoram 60 g/L SC had high toxicity to D.pyri low ecological risk against Haxyridis， which are the recommended candidates for the integrated pest management against D.pyri.
Key words
insecticide; Dasineura pyri; Harmonia axyridis; toxicity; safety evaluation
梨瘿蚊Dasineura pyri （Bouche）属双翅目瘿蚊科，又称梨卷叶瘿蚊、梨芽蛆，是梨树的主要害虫之一。早期在英国、法国、德国、荷兰、挪威、瑞典、丹麦、瑞士、意大利、新西兰和美国均有梨瘿蚊的记录[12]。1981年在我国安徽省安庆、宣城、巢湖等地发现该虫且为害严重[3]。2000年以后该虫在我国为害范围和为害程度逐渐增加[46]，成为梨树栽培中急需解决的重要问题。 在梨瘿蚊的各种防治技术中，化学防治是速度最快、效果较好的一种防治方法。梨瘿蚊的化学防治常用药剂包括77.5%敌敌畏乳油、 40%毒死蜱乳油、5%高效氯氟氰菊酯乳油、3%啶虫脒可湿性粉剂、5%阿维菌素乳油、10%吡虫啉可湿性粉剂等[711]。传统农药施药量大、毒性高，对环境中的水土造成污染。因此，迫切需要筛选高效低毒对环境友好的可用于果树害虫防治的农药。
生物防治是害虫综合治理中的重要组成部分。高效利用天敌生物，可将害虫数量控制在经济阈值以下[12]。异色瓢虫Harmonia axyridis （Pallas）（鞘翅目：瓢甲科）是梨树上的重要捕食性天敌[1314]，也是梨园中梨瘿蚊的主要捕食者[14]。关于异色瓢虫捕食梨瘿蚊已有部分研究[15]，但是化学药剂对异色瓢虫的安全性评价方面的报道较少，新的防治梨瘿蚊杀虫剂对天敌安全性方面的研究比较欠缺，这也为生物防治在生产中运用带来了困难。
本研究选择的7种杀虫剂是可用于果园中害虫防治的药剂。本研究的目的是通过测定7种杀虫剂对梨瘿蚊和异色瓢虫的毒力，评价药剂对害虫的毒力水平和对瓢虫的安全性，筛选出对害虫高效、对天敌安全的药剂，从而有效控制害虫、减少化学品投入和对水土环境的影响。
1 材料与方法
1.1 供試虫源
1.1.1 梨瘿蚊
于2019年5月18日，在位于江苏省苏州市吴中区的梨园，随机采集梨树（‘翠冠梨’）上的梨瘿蚊幼虫虫瘿。选择大小一致的幼虫作为供试虫源。
1.1.2 异色瓢虫
异色瓢虫卵购自北京阔野田园生物技术有限公司，将其在上海市农业科学院生态环境保护研究所养虫室内扩繁。异色瓢虫的养殖参照肖达等[16]的方法，略有修改。饲养过程为：种植大量蚕豆苗，将豆蚜Aphis craccivora Koch接于蚕豆苗进行扩大繁殖。将带有豆蚜的蚕豆苗放入一面是尼龙网（120目）的塑料盒（13.5 cm×23 cm×18 cm）中，同时将异色瓢虫卵块放入盒中。卵块孵化后直至成虫均在塑料盒中饲养。将养虫盒放入温度（26±1）℃，相对湿度为（60±5）%，光周期为L∥D=16 h∥8 h的养虫房，选择异色瓢虫1龄幼虫和1日龄成虫进行生物测定。
1.2 供试药剂
150 g/L茚虫威乳油（EC），5%氯虫苯甲酰胺悬浮剂（SC），美国杜邦公司;60 g/L乙基多杀菌素悬浮剂（SC），45%毒死蜱乳油（EC），美国陶氏益农公司;10%虫螨腈悬浮剂（SC），巴斯夫欧洲公司;2.2%甲氨基阿维菌素苯甲酸盐微乳剂（ME），浙江海正化工股份有限公司;2.5%高效氯氟氰菊酯水乳剂（EW），先正达南通作物保护有限公司。
1.3 7种杀虫剂对梨瘿蚊的毒力测定
采用浸渍法[17]。将采集到的带有梨瘿蚊的新鲜叶片放在显微镜下，用昆虫针剔除叶片上其他害虫，保留虫体大小一致、龄期相近的梨瘿蚊低龄幼虫。将7种药剂用含0.1% Triton X-100（以促进杀虫剂活性成分均匀分布处理叶片）的蒸馏水分别稀释成6个系列质量浓度，用含0.1% Triton X-100的蒸馏水作为对照[18]。试验设置43个处理，每10片叶作为一个重复，每个处理重复4次。将带虫叶片浸入不同浓度的药液中30 s，取出晾干后放入有湿滤纸的培养皿中，置于温度（25±1）℃，湿度（60±5）%的培养箱中培养，处理48 h，在显微镜下检查幼虫存活情况，统计活虫数和死虫数。用昆虫针轻轻触碰虫体，不动者计为死亡。
1.4 7种杀虫剂对异色瓢虫的毒力测定
异色瓢虫幼虫毒力测定采用滤纸接触法[19]。根据预试验的结果，将各杀虫剂用含0.1% Triton X-100稀释成6个系列质量浓度，用含0.1% Triton X-100的蒸馏水作为对照。试验设置43个处理，每处理重复4次。取直径为9 cm的滤纸放入塑料培养皿中，将1 mL药液均匀滴在培养皿内的滤纸上（按每667 m2施药量100 L计算而得）。滤纸自然晾干后，取10头1龄异色瓢虫幼虫放入含有药液的滤纸上，盖上培养皿盖子，放入温度为（26±1）℃，相对湿度（60±5）%，光周期为L∥D=14 h∥10 h的人工气候培养箱中。24 h后检查异色瓢虫幼虫的存活情况，以试虫不能正常爬行视为死亡。
7种杀虫剂对异色瓢虫成虫的毒力测定方法与幼虫测定相同。
1.5 7种杀虫剂对异色瓢虫的安全性评价
以杀虫剂的田间推荐使用浓度与异色瓢虫致死中浓度LC50相比，求得安全系数，评估药剂对异色瓢虫的安全程度。以杀虫剂对异色瓢虫的致死中浓度LC50与对梨瘿蚊的致死中浓度LC50相比，求得益害毒性比[19]。
1.6 数据统计与分析
毒力测定中，幼虫死亡率、校正死亡率按以下公式计算：
死亡率=死亡虫数处理总虫数×100%;
校正死亡率=处理死亡率-对照死亡率1-对照死亡率×100%。
根据试验所得数据，利用POLO软件[20]计算出致死中浓度（LC50）及其95%置信区间和斜率，95%置信区间不重叠时表明参数之间差异显著。
2 结果与分析
2.1 7种杀虫剂对梨瘿蚊幼虫的毒力
7种药剂对梨瘿蚊幼虫的LC50（见表1），梨瘿蚊幼虫对7种杀虫剂的敏感性由高到低的顺序为：25%高效氯氟氰菊酯EW、5%氯虫苯甲酰胺SC、60 g/L乙基多杀菌素SC、2.2%甲氨基阿维菌素苯甲酸盐ME、45%毒死蜱EC、150 g/L茚虫威EC、10%虫螨腈SC。梨瘿蚊幼虫对2.5%高效氯氟氰菊酯EW敏感性最强，LC50为5.540 mg/L，5%氯虫苯甲酰胺SC次之，LC50为10.015 mg/L，对10%虫螨腈SC的敏感性最低，LC50为404.147 mg/L。 从相对毒力指数可以看出，2.5%高效氯氟氰菊酯EW相对毒力指数最高，为4 185.49，其次是5%氯虫苯甲酰胺SC，相对毒力指数为2 315.29，60 g/L乙基多杀菌素SC相对毒力指数为697.92，2.2%甲氨基阿维菌素苯甲酸盐ME相对毒力指数为108.03，其他两个药剂的相对毒力指数均低于对照药剂45%毒死蜱EC。
2.2 7种杀虫剂对异色瓢虫幼虫的毒力
7种杀虫剂中2.2%甲氨基阿维菌素苯甲酸盐ME对异色瓢虫幼虫的毒力最高，LC50为0.043 mg/L，其次是2.5%高效氯氟氰菊酯EW，60 g/L乙基多杀菌素SC对其毒力最低，LC50为296.745 mg/L。相对毒力指数顺序为2.2%甲氨基阿维菌素苯甲酸盐ME
关键词 ：杀虫剂; 梨瘿蚊; 异色瓢虫; 毒力; 安全性评价
中图分类号：
S 482.3
文獻标识码： B
DOI： 10.16688/j.zwbh.2020016
Toxicity of seven insecticides on Dasineura pyri and safety
evaluation to predator Harmonia axyridis
TENG Haiyuan， ZHANG Tianshu， CHANG Xiaoli， GU Haotian， WANG Dongsheng*， YUAN Yongda*
（Eco-Environmental Protection Research Institute， Shanghai Academy of Agricultural Sciences， Shanghai 201403， China）
Abstract
In order to screen insecticides with high toxicity to Dasineura pyri and safety to its natural enemy Harmonia axyridis， toxicities of seven insecticides to D.pyri and H.axyridis were evaluated by dipping method and filter paper contact test， respectively. The results showed that after treatment on D.pyri larvae for 48 h， the median lethal concentrations （LC50） values ranked as lambda-cyhalothrin 2.5% EW （5.540 mg/L）>chlorantraniliprole 5% SC （10.015 mg/L）>spinetoram 60 g/L SC （33.224 mg/L）>emamectin benzoate 2.2% ME （214.644 mg/L）>chlorpyrifos 45% EC （231.876 mg/L）>indoxacarb 150 g/L EC （401.490 mg/L）>chlorfenapyr 10% SC （404.147 mg/L）. After treatment for 24 h， the toxicities of seven insecticides to the 1st instar larvae of H.axyridis were consistent with those to the adults of H.axyridis， spinetoram 60 g/L SC was the lowest， emamectin benzoate 2.2% ME， lambda-cyhalothrin 2.5% EW and chlorpyrifos 45% EC were more toxic than the other four insecticides. Overall， taken both the toxicity ratio and safety coefficient into account， chlorantraniliprole 5% SC and spinetoram 60 g/L SC had high toxicity to D.pyri low ecological risk against Haxyridis， which are the recommended candidates for the integrated pest management against D.pyri.
Key words
insecticide; Dasineura pyri; Harmonia axyridis; toxicity; safety evaluation
梨瘿蚊Dasineura pyri （Bouche）属双翅目瘿蚊科，又称梨卷叶瘿蚊、梨芽蛆，是梨树的主要害虫之一。早期在英国、法国、德国、荷兰、挪威、瑞典、丹麦、瑞士、意大利、新西兰和美国均有梨瘿蚊的记录[12]。1981年在我国安徽省安庆、宣城、巢湖等地发现该虫且为害严重[3]。2000年以后该虫在我国为害范围和为害程度逐渐增加[46]，成为梨树栽培中急需解决的重要问题。 在梨瘿蚊的各种防治技术中，化学防治是速度最快、效果较好的一种防治方法。梨瘿蚊的化学防治常用药剂包括77.5%敌敌畏乳油、 40%毒死蜱乳油、5%高效氯氟氰菊酯乳油、3%啶虫脒可湿性粉剂、5%阿维菌素乳油、10%吡虫啉可湿性粉剂等[711]。传统农药施药量大、毒性高，对环境中的水土造成污染。因此，迫切需要筛选高效低毒对环境友好的可用于果树害虫防治的农药。
生物防治是害虫综合治理中的重要组成部分。高效利用天敌生物，可将害虫数量控制在经济阈值以下[12]。异色瓢虫Harmonia axyridis （Pallas）（鞘翅目：瓢甲科）是梨树上的重要捕食性天敌[1314]，也是梨园中梨瘿蚊的主要捕食者[14]。关于异色瓢虫捕食梨瘿蚊已有部分研究[15]，但是化学药剂对异色瓢虫的安全性评价方面的报道较少，新的防治梨瘿蚊杀虫剂对天敌安全性方面的研究比较欠缺，这也为生物防治在生产中运用带来了困难。
本研究选择的7种杀虫剂是可用于果园中害虫防治的药剂。本研究的目的是通过测定7种杀虫剂对梨瘿蚊和异色瓢虫的毒力，评价药剂对害虫的毒力水平和对瓢虫的安全性，筛选出对害虫高效、对天敌安全的药剂，从而有效控制害虫、减少化学品投入和对水土环境的影响。
1 材料与方法
1.1 供試虫源
1.1.1 梨瘿蚊
于2019年5月18日，在位于江苏省苏州市吴中区的梨园，随机采集梨树（‘翠冠梨’）上的梨瘿蚊幼虫虫瘿。选择大小一致的幼虫作为供试虫源。
1.1.2 异色瓢虫
异色瓢虫卵购自北京阔野田园生物技术有限公司，将其在上海市农业科学院生态环境保护研究所养虫室内扩繁。异色瓢虫的养殖参照肖达等[16]的方法，略有修改。饲养过程为：种植大量蚕豆苗，将豆蚜Aphis craccivora Koch接于蚕豆苗进行扩大繁殖。将带有豆蚜的蚕豆苗放入一面是尼龙网（120目）的塑料盒（13.5 cm×23 cm×18 cm）中，同时将异色瓢虫卵块放入盒中。卵块孵化后直至成虫均在塑料盒中饲养。将养虫盒放入温度（26±1）℃，相对湿度为（60±5）%，光周期为L∥D=16 h∥8 h的养虫房，选择异色瓢虫1龄幼虫和1日龄成虫进行生物测定。
1.2 供试药剂
150 g/L茚虫威乳油（EC），5%氯虫苯甲酰胺悬浮剂（SC），美国杜邦公司;60 g/L乙基多杀菌素悬浮剂（SC），45%毒死蜱乳油（EC），美国陶氏益农公司;10%虫螨腈悬浮剂（SC），巴斯夫欧洲公司;2.2%甲氨基阿维菌素苯甲酸盐微乳剂（ME），浙江海正化工股份有限公司;2.5%高效氯氟氰菊酯水乳剂（EW），先正达南通作物保护有限公司。
1.3 7种杀虫剂对梨瘿蚊的毒力测定
采用浸渍法[17]。将采集到的带有梨瘿蚊的新鲜叶片放在显微镜下，用昆虫针剔除叶片上其他害虫，保留虫体大小一致、龄期相近的梨瘿蚊低龄幼虫。将7种药剂用含0.1% Triton X-100（以促进杀虫剂活性成分均匀分布处理叶片）的蒸馏水分别稀释成6个系列质量浓度，用含0.1% Triton X-100的蒸馏水作为对照[18]。试验设置43个处理，每10片叶作为一个重复，每个处理重复4次。将带虫叶片浸入不同浓度的药液中30 s，取出晾干后放入有湿滤纸的培养皿中，置于温度（25±1）℃，湿度（60±5）%的培养箱中培养，处理48 h，在显微镜下检查幼虫存活情况，统计活虫数和死虫数。用昆虫针轻轻触碰虫体，不动者计为死亡。
1.4 7种杀虫剂对异色瓢虫的毒力测定
异色瓢虫幼虫毒力测定采用滤纸接触法[19]。根据预试验的结果，将各杀虫剂用含0.1% Triton X-100稀释成6个系列质量浓度，用含0.1% Triton X-100的蒸馏水作为对照。试验设置43个处理，每处理重复4次。取直径为9 cm的滤纸放入塑料培养皿中，将1 mL药液均匀滴在培养皿内的滤纸上（按每667 m2施药量100 L计算而得）。滤纸自然晾干后，取10头1龄异色瓢虫幼虫放入含有药液的滤纸上，盖上培养皿盖子，放入温度为（26±1）℃，相对湿度（60±5）%，光周期为L∥D=14 h∥10 h的人工气候培养箱中。24 h后检查异色瓢虫幼虫的存活情况，以试虫不能正常爬行视为死亡。
7种杀虫剂对异色瓢虫成虫的毒力测定方法与幼虫测定相同。
1.5 7种杀虫剂对异色瓢虫的安全性评价
以杀虫剂的田间推荐使用浓度与异色瓢虫致死中浓度LC50相比，求得安全系数，评估药剂对异色瓢虫的安全程度。以杀虫剂对异色瓢虫的致死中浓度LC50与对梨瘿蚊的致死中浓度LC50相比，求得益害毒性比[19]。
1.6 数据统计与分析
毒力测定中，幼虫死亡率、校正死亡率按以下公式计算：
死亡率=死亡虫数处理总虫数×100%;
校正死亡率=处理死亡率-对照死亡率1-对照死亡率×100%。
根据试验所得数据，利用POLO软件[20]计算出致死中浓度（LC50）及其95%置信区间和斜率，95%置信区间不重叠时表明参数之间差异显著。
2 结果与分析
2.1 7种杀虫剂对梨瘿蚊幼虫的毒力
7种药剂对梨瘿蚊幼虫的LC50（见表1），梨瘿蚊幼虫对7种杀虫剂的敏感性由高到低的顺序为：25%高效氯氟氰菊酯EW、5%氯虫苯甲酰胺SC、60 g/L乙基多杀菌素SC、2.2%甲氨基阿维菌素苯甲酸盐ME、45%毒死蜱EC、150 g/L茚虫威EC、10%虫螨腈SC。梨瘿蚊幼虫对2.5%高效氯氟氰菊酯EW敏感性最强，LC50为5.540 mg/L，5%氯虫苯甲酰胺SC次之，LC50为10.015 mg/L，对10%虫螨腈SC的敏感性最低，LC50为404.147 mg/L。 从相对毒力指数可以看出，2.5%高效氯氟氰菊酯EW相对毒力指数最高，为4 185.49，其次是5%氯虫苯甲酰胺SC，相对毒力指数为2 315.29，60 g/L乙基多杀菌素SC相对毒力指数为697.92，2.2%甲氨基阿维菌素苯甲酸盐ME相对毒力指数为108.03，其他两个药剂的相对毒力指数均低于对照药剂45%毒死蜱EC。
2.2 7种杀虫剂对异色瓢虫幼虫的毒力
7种杀虫剂中2.2%甲氨基阿维菌素苯甲酸盐ME对异色瓢虫幼虫的毒力最高，LC50为0.043 mg/L，其次是2.5%高效氯氟氰菊酯EW，60 g/L乙基多杀菌素SC对其毒力最低，LC50为296.745 mg/L。相对毒力指数顺序为2.2%甲氨基阿维菌素苯甲酸盐ME