【摘 要】
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[目的]在基因工程菌中实现猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF7基因的高效表达,对表达的重组蛋白进行纯化,并探讨其免疫学活性及应用价值.[方法]将已构建好的重组表达载体pET-
【机 构】
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内蒙古民族大学动物科技学院,北京市农林科学院畜牧兽医研究所,北京市畜牧兽医总站,内蒙古民族大学生命科学学院,北京庄笛浩禾生物医学科技有限公司,内蒙古农业大学动物科学与医学学院,中国农业大学动物医学院
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[目的]在基因工程菌中实现猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF7基因的高效表达,对表达的重组蛋白进行纯化,并探讨其免疫学活性及应用价值.[方法]将已构建好的重组表达载体pET-ORF7转化大肠杆菌BL21 (DE3) ,用IPTG在最适条件下诱导表达,其表达产物用SDS-PAGE和Western Blot进行检测.应用Ni-NTA His·Bind(R) Resin层析柱在变性条件下纯化表达产物,通过梯度透析进行复性.采用Western Blot及间接ELISA法检测复性后重组蛋白的免疫学活性.[结果]重组质粒 pET-ORF7在大肠杆菌中以融合形式成功表达,融合表达产物主要以包涵体形式存在.SDS-PAGE检测所表达的重组蛋白分子量为33 kD左右,与预期大小相符.Bandscan软件对表达蛋白分析发现,表达产物约占菌体蛋白的50%.Western Blot及间接ELISA法显示复性后的重组蛋白与PRRSV阳性血清有特异性结合反应,表明其具有良好的免疫学活性.[结论]该试验将为进一步研制PRRSV单克隆抗体及诊断试剂盒奠定基础.
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