【摘 要】
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Hfq作为一种保守的RNA分子伴侣蛋白,主要通过与nc RNA结合来参与调控单核细胞增生李斯特菌（LM）的生命活动.利用基因重叠延伸PCR（SOE-PCR）方法构建具有氯霉素抗性的p KSV7-Δhfq重
【机 构】
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石河子大学动物科技学院; 中国农业科学院兰州兽医研究所;
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(31360596,30960274);国际科技合作专项(2014DFR31310)资助~~
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Hfq作为一种保守的RNA分子伴侣蛋白,主要通过与nc RNA结合来参与调控单核细胞增生李斯特菌（LM）的生命活动.利用基因重叠延伸PCR（SOE-PCR）方法构建具有氯霉素抗性的p KSV7-Δhfq重组穿梭质粒,电转化至新疆野毒株LM-SB5感受态细胞后在42℃和氯霉素压力下进行同源重组,筛选LM-SB5 hfq基因缺失株,并分析hfq基因缺失株在不同温度、pH、高盐、乙醇、H2O2、Triton X-100胁迫环境下的适应能力.结果成功构建得到一株遗传性稳定的LM hfq基因缺失株LM-Δhfq;LM-Δhfq对5%NaCl、3.5%乙醇、0.1%H2O2的适应能力显著降低,对30℃、37℃、42℃、pH 4、pH 9及Triton X-100的适应能力没有显著变化,表明Hfq参与了LM对高盐、乙醇、H2O2胁迫环境的适应过程.本研究为进一步揭示Hfq蛋白在参与ncRNA调控细菌生命活动的机制奠定了基础.
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