云南撒坝猪致病性大肠埃希菌外膜蛋白F（OmpF）缺失株的构建

来源 :上海畜牧兽医通讯 | 被引量 : 0次 | 上传用户：z46810560

【摘要】

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为了进一步评价E．coliOmpF的功能，我们构建了E．coli外膜蛋白F的缺失突变株。首先根据E．coliF-M-2的测序后的0mpF基因序列设计PCR敲除引物，引物5’端分别有50bp和48bp的拟敲除基因

【作者】

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吴程华崔艳艳高洪严玉霖赵汝

【机构】

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云南农业大学动物科学技术学院

【出处】

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上海畜牧兽医通讯

【发表日期】

：

2015年4期

【关键词】

：

外膜蛋白F 撒坝猪致病性大肠埃希菌 λ-Red重组系统基因敲除聚丙烯酰胺凝胶电泳

【基金项目】

：

基金项目：国家自然科学基金（项目批准号：31260594）,云南省高校科技创新团队支持计划资助（云教科[2011]14号）,云南省现代农业生猪产业技术体系建设（云财农[2009]171号）

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为了进一步评价E．coliOmpF的功能，我们构建了E．coli外膜蛋白F的缺失突变株。首先根据E．coliF-M-2的测序后的0mpF基因序列设计PCR敲除引物，引物5’端分别有50bp和48bp的拟敲除基因的同源臂，3’端为扩增引物，以pKD3为模板，扩增两侧含FRT位点的氯霉素抗性基因，然后利用pKD46的λ-Red重组系统替换E．coliF-M-2基因组上的0mpF基因，再利用表达FLP重组酶的质粒pCP20将FRT位点之间的氯霉素抗性基因删除，最后用鉴定引物进行鉴定并测序。结果成功地构建了云南撒

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