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目的 构建has-miR-9表达质粒和NRP1-3 UTR荧光素酶报告质粒,探讨miR-9对NRP1的靶向调控作用及其在A549细胞中的辐射效应.方法 利用生物信息学方法预测has-miR-9与NRP1-3UTR的结合位点;将miR-9序列插入载体pcDNA-DEST47中构建真核表达质粒,同时构建NRP1-3 UTR的野生型和突变型荧光素酶报告质粒,并与pcDNA-DEST-miR-9质粒共转染至A549细胞,分析miR-9对其调控作用;miR-29b作为阴性对照,观察miR-9对NRP1的靶向作用.采用West blot方法,验证miR-9对NRP1蛋白表达的抑制作用及照射后A549细胞NRP1蛋白表达变化;采用实时定量PCR方法检测10 Gy电离辐射照射后A549细胞miR-9表达量.结果 荧光素酶活性实验结果显示,miR-9可以显著下调野生型NRP1-3 UTR质粒的荧光素酶活性(t=3.906,P＜0.05),而不影响突变型质粒的荧光素酶活性,同时证实miR-9以外的miRNA(miR-29b)不能抑制野生型NRP1-3 UTR质粒的荧光素酶活性.转染miR-9 mimic后,在A549细胞中,靶基因NRP1蛋白的表达受抑制.10 Gy照射后,A549细胞中miR-9表达量下调(t=37.319,P＜0.05),而NRP1蛋白表达升高.结论 在A549辐射效应中miR-9通过靶向结合NRP1基因3UTR,特异性调控NRP1蛋白表达.