GeXP联合多重PCR系统在腹泻病毒检测中的应用

来源 :中华实验和临床病毒学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:luan0778
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的

利用GeXP系统结合多重PCR技术,建立诺如病毒(GI和GII组)、轮状病毒、星状病毒的方法。

方法

根据4种病毒的序列特征,制备病毒标准品质粒,收集病原体样本,利用GenBank下载4种病毒的核苷酸序列,根据4种病毒的序列特征,利用GeXP express Profiler设计特异性引物,优化条件使GeXP系统能够特异性、快速的检测对应病毒。评价其灵敏度、特异性及功效,并应用于120份临床标本检测。

结果

优化后的引物能特异性的检测各病毒,无交叉反应;灵敏度为100%,特异性为99.53%,功效为99.62%,与荧光定量PCR检测结果一致性为99.51%,检测浓度最低至5×103/μl拷贝,在已知临床样本灵敏度高、特异性好。

结论

GeXP方法的建立为快速、准确的检测这4种腹泻病毒提供了便利,对口岸突发群体性腹泻的病原体检出有重要意义。

其他文献
目的研究病毒共感染白纹伊蚊C6/36细胞后,白纹伊蚊浓核病毒-3(AalDV-3)对登革2型病毒(DENV-2)在细胞内的复制的影响。方法C6/36细胞感染AalDV-3后5 d,共感染DENV-2,设立单独感染AalDV-3与DENV-2为对照组。共感染后不同时间点,qPCR法检测病毒的拷贝数;共聚焦显微镜检测DENV-2感染率;共感染后37 ℃孵育24 h后,于1~2 d以流式细胞术检测细胞凋
目的分析慢性乙型肝炎相关性肝细胞癌(HCC)患者肝癌组织及癌旁组织PDCD1基因拷贝数差异。方法利用Taqman real-time PCR检测27例肝细胞癌患者肝癌切除术后石蜡包埋肝癌组织和癌旁组织PDCD1基因(PDCD1)拷贝数。结果肝癌组织及癌旁组织PDCD1基因拷贝数之间无显著差异(P>0.05);肝癌组织及癌旁组织PDCD1基因拷贝数与术前AFP水平无显著相关性(P>0.05);肝癌组
目的探讨双氢青蒿素(DHA)能否影响具有突变型p53的人肝癌细胞株Huh-7增殖、凋亡及迁移等生物学行为及其作用机制。方法DHA处理Huh-7细胞后MTT法检测增殖抑制率,免疫荧光分析DNA双链损伤情况,WB法测γH2AX蛋白表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡。细胞划痕法检测DHA对细胞迁移能力的影响。WB法测细胞中STAT3蛋白的活性及表达水平。结果DHA能抑制Huh-7细胞的增殖活性,抑制作用呈
目的通过易错PCR技术提高1株人源抗狂犬病毒单链抗体RV08的亲和力。方法采用Agilent公司GeneMorph II Random Mutagenesis Kit对RV08轻、重链可变区进行易错PCR扩增,随机引入突变,通过单链抗体(Single-chain antibody fragment ScFv)噬菌体呈现技术构建随机突变抗体文库,经狂犬病毒颗粒aG株固相富集筛选,通过ELISA和IF
目的研究人类免疫缺陷病毒(HIV)特异性CD8T细胞在体外增殖反应的影响因素。方法应用3种不同的抗原刺激方式在体外刺激HIV感染者病毒特异性CD8 T细胞增殖,并比较在培养体系中添加外源性细胞生长因子IL-2对HIV特异性CD8 T细胞增殖的影响。结果与将MHC I匹配HIV抗原肽直接加入外周血淋巴细胞(PBMCs)持续刺激CD8 T细胞和仅刺激CD8 T细胞2 h这两种方法相比,从PBMCs中去
目的荧光抗体病毒中和试验(FAVN)技术应用于汉坦病毒中和抗体的检测的探索与改进。方法采用固定病毒稀释血清的方法,将不同稀释度的血清和固定浓度的病毒经37 ℃中和1 h,然后加入到Vero-E6细胞已长成单层的96孔板上,37 ℃、5% CO2培养7 d,经固定和荧光染色,即可在荧光显微镜下判定结果,根据公式计算血清的中和滴度。结果最合适的细胞浓度为4×104~4.5×104/孔,病毒血清混合液在
目的了解妊娠期围生期水痘病毒感染后的妊娠结局。方法检索1994年到2015年6月间发表的具有完整孕产和临床特点描述的妊娠合并水痘及新生儿水痘(Neonatal Varicella,NV)患者的文献,并将信息纳入综合分析。结果71例孕产期水痘患者中孕妇水痘发病时间为孕7周-产后1周(中位时间产前4 d),伴发合并症9例;71例水痘感染孕妇出生健康婴儿42例,NV28例,先天性水痘综合征1例。NV发病
目的为了进一步对临床中可能出现HDV抗体IgM阳性,常规HBV五项检测阴性的特殊患者进行诊断,从而对HDV的感染进行准确的判定。方法设计HBV和HDV的特异引物,通过提取血清中病毒的核酸,扩增出病毒的基因组序列,使用BLAST在Genebank中进行比对。结果本实验在这例血清中扩增到了HDV和HBV的基因序列,通过BLAST后发现扩增序列与HBV和HDV基因序列存在较高的一致性。结论在临床诊断中,
期刊
人鼻病毒(Human Rhinovirus,HRV)是引起人类呼吸道感染的最常见病原体之一,通常表现为较轻且具自限性的上呼吸道感冒症状,也可以感染下呼吸道引起肺炎、儿童喘息、哮喘加重以及成人慢性阻塞性肺疾病(COPD)等。自1956年人类分离到第一株HRV后,目前已有150多种血清型,HRV被认为是人类急性上呼吸道感染的最常见病原。近几年随着分子生物学技术的广泛应用,HRV研究发展迅速,尤其C型的
期刊