基于Keap1/Nrf2/ARE信号通路探讨葛花、枳椇子及其配伍对急性酒精性肝损伤小鼠抗氧化应激的作用机制

来源 :中国实验方剂学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:czqmip
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目的:观察葛花、枳椇子及其配伍对急性酒精性肝病的改善作用,为临床用药提供科学依据,并为开展其他酒精性相关疾病的研究提供思路和借鉴方法:采用一次性灌胃给予56%(V/V)红星二锅头酒(0.012 mL·g-1)建立小鼠急性酒精性肝损伤模型,120只雄性ICR小鼠按体重随机分成空白组、模型组、水飞蓟宾组、葛花组、枳椇子组、葛花枳椇子配伍Ⅰ(配伍比例为1:1)组、葛花枳椇子配伍Ⅱ(配伍比例为1:2)组、葛花枳椇子配伍Ⅲ(配伍比例为2:1)组,每组15只。各给药组按0.01 mL· g-1预防性灌胃相应药物3 d,除空白组外,其余各组小鼠按0.012 mL·g-1分别灌胃给予二锅头酒,于酒后12 h处死小鼠,并观察药物对小鼠肝功能、抗氧化应激能力的影响;苏木素-伊红(HE)染色观察肝脏病理变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组小鼠Kelch样ECH相关蛋白1(Keap1)-核转录因子E2相关因子2(Nrf2)-抗氧化响应元件(ARE)信号通路相关蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测相关基因表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)水平,肝组织中丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)含量显著升高(P<0.01);谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)活性显著性降低(P<0.01)。与模型组比较,葛花-枳椇子(2:1)组小鼠ALT、AST和ALP水平显著减低(P<0.01),肝脏组织中MDA、ROS水平均显著减低(P<0.01),GSH、SOD水平均显著升高(P<0.01);肝脏脂肪变损伤均减轻,显著上调Nrf2 mRNA及蛋白表达(P<0.01),显著下调Keap1 mRNA及蛋白表达(P<0.01)。结论:葛花、枳椇子及其配伍组合对小鼠急性酒精性肝损伤有一定的预防作用,其机制可能与调控肝脏内Keap1/Nrf2/ARE信号通路,恢复并上调由乙醇所破坏的肝脏氧化平衡有关,从而有效遏制酒精性肝病的发展。
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