【摘 要】
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目的 利用酿酒酵母系统建立表达脊髓灰质炎I型病毒（PoliovirusI）病毒样颗粒的技术方法，为研究新型脊髓灰质炎预防性重组疫苗奠定前期基础。方法合成密码子优化后的PoliovirusI型的P1及3CD基因，通过分子克隆技术构建同时表达P1和3CD基因的表达载体，通过化学法转到酿酒酵母胞内，诱导表达并破碎酵母后，利用氯化铯密度梯度离心法提取物进行初步纯化并鉴定。结果重组酿酒酵母质粒通过酶切及测序
【机 构】
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北京工业大学生命科学与生物工程学院病毒药理室,北京100124,北京工业大学生命科学与生物工程学院病毒药理室,北京100124,中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所
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目的 利用酿酒酵母系统建立表达脊髓灰质炎I型病毒（PoliovirusI）病毒样颗粒的技术方法，为研究新型脊髓灰质炎预防性重组疫苗奠定前期基础。方法合成密码子优化后的PoliovirusI型的P1及3CD基因，通过分子克隆技术构建同时表达P1和3CD基因的表达载体，通过化学法转到酿酒酵母胞内，诱导表达并破碎酵母后，利用氯化铯密度梯度离心法提取物进行初步纯化并鉴定。结果重组酿酒酵母质粒通过酶切及测序鉴定证明P1及3CD片段成功插入到pESC．URA载体中。密码子优化后基因与未优化基因编码的氨基酸序列完全一致。透射电镜分析显示将重组质粒转到酿酒酵母细胞内可以有效表达并组装脊髓灰质炎I型病毒的病毒样颗粒。结论在酿酒酵母细胞内同时表达P1和3CD蛋白可以有效组装脊髓灰质炎I型病毒的病毒样颗粒。
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