突变型人PRKAG2基因的克隆及其真核表达载体构建

来源 :海军医学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户：boylsc

【摘要】

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目的构建含有突变位点R302Q的PRKAG2的真核表达载体。方法首先通过RT—PCR获得人PRKAG2的基因序列，然后采用PCR定点突变获得含有R302Q的PRKAG2基因序列，最后通过酶切连接至真核

【作者】

：

陈挺张必利何平程平郑兴

【机构】

：

第二军医大学附属长海医院心内科

【出处】

：

海军医学杂志

【发表日期】

：

2013年2期

【关键词】

：

PRKAG2基因 RT—PCR 定点突变 pIRES2-EGFP载体 PRKAG2 gene RT-PCR Site-directed mutagenes

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目的构建含有突变位点R302Q的PRKAG2的真核表达载体。方法首先通过RT—PCR获得人PRKAG2的基因序列，然后采用PCR定点突变获得含有R302Q的PRKAG2基因序列，最后通过酶切连接至真核表达载体plRES2-EGFP中。结果通过liT—PCR获得的人PRKAG2的编码区序列1710bp，经测序比对与NCBI公布的序列完全一致，通过PCR定点突变拼接900bp和800bp片段获得了含有R302Q突变位点的PRKAG2，酶切连接至plRES2-EGFP载体中，经菌落PCR筛选和酶切验证获得阳性克

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