【摘 要】
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目的: 克隆表达大肠杆菌莽草酸脱氢酶基因aroE,并测定其生物学活性.方法: 根据大肠杆菌中aroE基因的序列设计了一对引物,利用PCR 技术扩增得到aroE基因,将其克隆入高效原核表
【机 构】
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军事医学科学院放射与辐射医学研究所,北京,100850;南昌大学生命科学学院,南昌,330047
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目的: 克隆表达大肠杆菌莽草酸脱氢酶基因aroE,并测定其生物学活性.方法: 根据大肠杆菌中aroE基因的序列设计了一对引物,利用PCR 技术扩增得到aroE基因,将其克隆入高效原核表达载体pBV220,以双脱氧法进行测序,然后对该重组子利用温度诱导表达,并测酶的生物活性.结果: 构建了aroE基因的克隆和表达重组子, aroE基因获得高效表达,SDS-PAGE 图谱显示新增30×103 蛋白带,酶活性测定结果表明奎尼酸脱氢酶的相对酶活性是5.6倍.结论: 实现了莽草酸脱氢酶基因在大肠杆菌中的高效表达,证明了其具有奎尼酸脱氢酶活性,为构建产奎尼酸工程菌种奠定了基础.
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