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目的 构建抗人肝癌嵌合抗体,并在Sp2/0细胞中进行稳定高效表达.方法分别将HAb18轻、重链可变区基因克隆入真核表达载体pDHL构建重组载体pDHL/chHAb18.酶切及测序鉴定后,转染Sp2/0细胞,经甲氨蝶蛉(MTX)筛选获得抗性克隆.采用有限稀释法单克隆化后持续MTX加压培养.通过ELISA筛选高效表达的单克隆细胞株.表达产物纯化后,进行SDS-PAGE和Western blot检测,同时采用ELISA和免疫荧光法检测其抗原结合特异性. 结果成功构建了重组嵌合IgG抗体chHAb18的真核表达载体pDHL/chHAb18.转化Sp2/0细胞后,初步筛选得到了高效表达chHAb18的细胞株.经MTX加压培养,1株细胞的chHAb18表达量达到10mg/L.SDS-PAGE和Western blot检测结果表明:目的蛋白分子质量约为160×103,还原后为2条带,分子质量约为52×103和27×103.上述蛋白条带均与羊抗人IgG抗体特异结合. 结论成功构建了抗人肝癌基因工程嵌合抗体chHAb18,并在骨髓瘤细胞中获得高效表达.为其进一步的应用研究奠定了基础。