【摘 要】
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在猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)经典毒株CV777毒株S基因基础上,选取S抗原优势表位EP(499～638 aa、748～755 aa、764～771 aa和1368～1374 aa)和超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)基因,优化后通过编码柔性连接肽(GGGGS)密码子进行连接,分别构建重组质粒pET-28a-S、pET-28a-S-SEA和pET-28a-S-EP-SEA.表达纯化的重组蛋白经SDS-PAGE和Western blot鉴定
【机 构】
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锦州医科大学畜牧兽医学院,辽宁锦州121001
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在猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)经典毒株CV777毒株S基因基础上,选取S抗原优势表位EP(499～638 aa、748～755 aa、764～771 aa和1368～1374 aa)和超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)基因,优化后通过编码柔性连接肽(GGGGS)密码子进行连接,分别构建重组质粒pET-28a-S、pET-28a-S-SEA和pET-28a-S-EP-SEA.表达纯化的重组蛋白经SDS-PAGE和Western blot鉴定后免疫小鼠,以评价重组蛋白的免疫原性.结果 显示,重组质粒经IPTG诱导后获得表达,SDS-PAGE分析显示其相对分子质量分别为21,48,54 kDa,与理论值相符.Western blot结果显示,重组蛋白与PEDV阳性血清具有良好的反应原性.纯化后的重组蛋白免疫小鼠,产生了较强的体液免疫和细胞免疫,其中免疫重组蛋白S-EP-SEA产生特异性IgG高于免疫重组蛋白S和S-SEA,细胞因子IFN-γ、IL-2和IL-4水平也高于其他2组.结果 表明,本试验制备的重组蛋白S-EP-SE具有良好的免疫原性,为猪流行性腹泻多表位疫苗研制提供了理论依据.
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