目的 分析高糖、高脂环境下胰岛微血管内皮细胞(IMVC)分泌E-选择素、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β的变化,研究沉默信息调节蛋白1(SIRT1)/核因子-κB信号途径异常在内皮细胞炎性反应激活中的作用.方法 合成含绿色荧光蛋白报告基因的小鼠SIRT1基因重组质粒,以Lipofectamine 2000转染IMVC.之后将IMVC分为4组:正常对照组、高糖高脂组、高糖高脂+ SIRT1基因转染组、高糖高脂+基因转染对照组.高糖高脂组以33.3 mmol/L葡萄糖+0.5mmol/L棕榈酸处理48 h.高糖高脂+SIRT1基因转染组在高糖高脂处理前以SIRT1基因重组质粒预处理48 h；高糖高脂+基因转染对照组在高糖高脂处理前以空质粒进行预处理48 h.应用实时荧光定量PCR法检测SIRT1基因转染效果及各组核因子-κB的mRNA水平,应用酶联免疫吸附法测定细胞培养上清中TNF-α、IL-1β、E-选择素的水平.结果 与正常对照组相比,高糖高脂组SIRT1 mRNA表达明显下降(0.58 ±0.12,P＜0.01)；而高糖高脂+SIRT1基因转染组的SIRT1基因表达明显升高,与高糖高脂组相比差异显著[(1.55±0.43)比(0.65±0.37),P＜0.01].与正常对照组相比,高糖高脂组核因子-κB mRNA(1.59 ±0.32,P＜0.01)、E-选择素[(48.46±1.04)比(67.12±0.57) ng/L,P＜0.01]、TNF-α[(467.46±8.98)比(621.14±11.26) ng/L,P＜0.01]、IL-1β[(63.32±1.48)比(118.43±1.40) ng/L,P＜0.01]的水平明显升高(P＜0.01).与高糖高脂组相比,高糖高脂+SIRT1基因转染组核因子-κB mRNA (0.95±0.31,P＜0.01)及TNF-α[(451.38±15.91)比(618.89±7.23) ng/L,P＜0.01]明显下降(P＜0.01),E-选择素、IL-1β无明显变化(P＞0.05).结论 高糖高脂环境下,IMVC存在炎性反应激活,可释放大量炎性反应细胞因子.SIRT1-核因子-κB-TNF-α通路异常与IMVC的炎性反应激活密切相关,早期干预该信号通路可能在预防及治疗2型糖尿病的胰岛炎性反应中具有重要意义。
SIRT1对高糖高脂培养胰岛微血管内皮细胞炎性反应激活的影响
【摘 要】
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目的 分析高糖、高脂环境下胰岛微血管内皮细胞(IMVC)分泌E-选择素、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β的变化,研究沉默信息调节蛋白1(SIRT1)/核因子-κB信号途径异常在内皮细胞炎性反应激活中的作用.方法 合成含绿色荧光蛋白报告基因的小鼠SIRT1基因重组质粒,以Lipofectamine 2000转染IMVC.之后将IMVC分为4组:正常对照组、高糖高脂组、高糖高脂+
【机 构】
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300270,天津滨海新区大港医院内分泌科,300070,天津医科大学基础医学院,300270,天津滨海新区大港医院内分泌科,300270,天津滨海新区大港医院内分泌科,300270,天津滨海新区大港
【出 处】
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国际内分泌代谢杂志
【发表日期】
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2013年33期
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