洋葱黄矮病毒(Onion yellow dwarf virus,OYDV)是危害葱属植物的主要病毒之一.本试验根据OYDV外壳蛋白(coat protein,CP)基因保守序列设计特异性引物,建立并优化了OYDV实时荧光RT-PCR检测方法,并对其特异性、敏感性和重复性进行了验证.结果显示:标准曲线Ct值与模板拷贝数的对数呈良好的线性关系,相关系数R2为0.996,扩增效率为95.921％;与青葱X病毒(Shallot virus X,SVX)、葱潜隐病毒(Shallot latent virus,SLV)均无交叉反应;最低检出限为2.0×102 copies· μL-1,比常规RT-PCR大约高1000倍;组内和组间变异系数均小于2％,具有良好的重复性.利用该方法对分别采集的各45份疑似OYDV感染的分蘖洋葱(珠葱)和大蒜样品进行检测,检出率较常规RT-PCR分别高40.00、6.67百分点,能更加客观地反映样品带毒情况.本试验建立的OYDV实时荧光RT-PCR方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,可用于田间样品OYDV检测,为OYDV的有效防控提供技术支持.