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为了掌握母牛孕酮水平变化信息，为发情鉴定、妊娠鉴别和卵巢疾病诊断提供参考依据，根据EHSA基本原理，研制了奶牛孕酮ELISA检测试剂盒。结果表明，采用孕酮-牛血清白蛋白（P4-BSA）交联物解决了在酶标板上包被抗原的问题，且抗原容易保存；而利用孕酮-卵清白蛋白（P4-OVA）交联物免疫兔子获得高效价抗体，能阻断1ng/mL孕酮水平；并以ELISA棋盘测定法确定P4-BSA 2000倍、血清500倍稀释为该试剂盒最佳工作浓度。该试剂盒以牛粪作为检测样品，即通过粪便中的孕酮水平变化可为奶牛发情鉴定、妊娠鉴别、