埃兹蛋白（Ezrin）及其突变体的原核表达与纯化

来源 :氨基酸和生物资源 | 被引量 : 0次 | 上传用户：cnmSymbian

【摘要】

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Thr567位点磷酸化是ezrin活化的必需条件。利用定点突变引物将T567突变为A或D，通过PCR扩增出相应的基因片段，将其通过T4连接酶连接至含His标签的原核表达载体pET-20b（＋），构建了原核

【作者】

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刘腾飞陈妙娟高学娟刘小会刘朗夏

【机构】

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暨南大学生命与健康工程研究院

【出处】

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氨基酸和生物资源

【发表日期】

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2012年4期

【关键词】

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埃兹蛋白野生型组成型激活突变显性负突变融合蛋白表达与纯化 ezrin wild type constitutively active mutant

【基金项目】

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国家973重点基础研究发展计划（2011CB910701）,广东省高等学校高层次人才项目E20i13431号,中央高校基本科研业务费专项资金（21609317,21611430,21610101）

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Thr567位点磷酸化是ezrin活化的必需条件。利用定点突变引物将T567突变为A或D，通过PCR扩增出相应的基因片段，将其通过T4连接酶连接至含His标签的原核表达载体pET-20b（＋），构建了原核重组质粒pET-20b（＋）～Ez WT，pET-20b（＋）-EzT567A和pET-20b（＋）-EzT567D。转化表达宿主大肠杆菌Rosseta后，用异丙基-伊硫代半乳糖诱导重组蛋白的表达。重组蛋白经亲和镍柱纯化以后，应用westernblot鉴定纯化的融合蛋白。Ezrin野生型及其组成型激活和显

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