【摘 要】
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为提高重组新城疫病毒(NDV)外源基因表达量,本研究采用内部核糖体进入位点序列(IRES)构建表达鸡传染性法氏囊病病毒超强毒(vvIBDV)H LJ07株V P2双拷贝基因的重组NDV(rClone30
【机 构】
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东北农业大学生命科学学院生物制药教研室;
【基金项目】
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黑龙江省成果产业化项目(1252CG ZH 29);黑龙江省发改委(黑发改项目[2011]1570);东北农业大学博士启动基金(2012RCB43)
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为提高重组新城疫病毒(NDV)外源基因表达量,本研究采用内部核糖体进入位点序列(IRES)构建表达鸡传染性法氏囊病病毒超强毒(vvIBDV)H LJ07株V P2双拷贝基因的重组NDV(rClone30-V P2-IRES-V P2),同时构建表达单拷贝V P2基因的重组NDV(rClone30-V P2)作为对照。间接免疫荧光试验表明V P2蛋白在感染两种重组病毒的鸡胚成纤维细胞(DF-1)中得到表达。Real-time PCR检测结果表明rClone30-VP2-IRES-V P2中VP2 mRNA转录水平明显高于rClone30-VP2。生长曲线分析表明,两株重组病毒株与亲本NDV LaSota(Clone30)株在细胞培养中可以同样稳定复制。重组病毒株在鸡胚中多次传代之后仍稳定表达VP2蛋白。本研究通过建立NDV的反向遗传操作系统构建了独立表达IBD V双拷贝V P2基因的重组NDV,并证明双拷贝基因的表达水平优于单拷贝基因,为提高重组NDV外源基因的表达量提供了新的思路。
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