目的本实验通过3种实验方法对1种单抗的消光系数进行实验确证并与理论消光系数进行比较研究。方法根据氨基酸一级序列,计算出单抗在280 nm处的理论摩尔消光系数,通过质谱确定单抗相对分子质量,计算出理论消光系数;分别用3种方法测定单抗的蛋白质浓度,根据朗伯-比尔定律c=A/EL计算实验消光系数。方法一为利用尿素变性蛋白测定其非折叠状态(变性状态)的实验消光系数,计算得出折叠状态(天然状态)的消光系数;方法二通过酸水解蛋白,结合Acc Q Fluor试剂盒利用HPLC对蛋白进行准确定量,计算该抗体的实验消光系数;方法三通过酸水解蛋白,利用氨基酸序列分析仪对蛋白进行准确定量,计算蛋白的实验消光系数。结果理论消光系数E280为1.453 m L·mg-1·cm-1;3种实验方法确定的单抗消光系数分别为(1.442±0.009)、(1.529±0.032)、(1.458±0.019)m L·mg-1·cm-1,均值为(1.477±0.044)m L·mg-1·cm-1,RSD=2.979%(n=9)。研究结果显示,该单抗的理论消光系数与实验消光系数的差异较小(0.069%~7.708%)。结论本实验运用3种方法确证单抗的实验消光系数,所建立的消光系数测定和验证方法可用于抗体药物蛋白含量的测定。