【摘 要】
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RT-PCR 获取猪CYP3A29 基因序列后与克隆载体PMD18-T 相连,得到PMD18-T-CYP3A29 重组质粒并测序验证,利用XhoI 和NotI 双酶切重组质粒及pcDNA3.1(+)/zeo,回收后连接,构建
【机 构】
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南京农业大学动物科技学院,江苏南京210095;江苏省农业科学院畜牧所,江苏南京210014江苏省农业科学院畜牧所,江苏南京210014
【出 处】
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江苏省遗传学会2015年学术研讨会
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RT-PCR 获取猪CYP3A29 基因序列后与克隆载体PMD18-T 相连,得到PMD18-T-CYP3A29 重组质粒并测序验证,利用XhoI 和NotI 双酶切重组质粒及pcDNA3.1(+)/zeo,回收后连接,构建重组真核表达载体pcDNA3.1(+)/zeo-CYP3A29,双酶切及测序验证其正确性,并以脂质体2000 将其转染至猪肺泡巨噬细胞系3D4/21,经zeocin 抗性筛选,获得稳定表达CYP3A29基因的猪肺泡巨噬细胞系,借助RT-PCR 及Wesrern-blot 鉴定基因表达水平.最终,成功获得表达CYP3A29 的细胞株,连续培养10 代后,检测仍然有表达,证实稳定表达CYP3A29 基因的猪肺泡巨噬细胞系构建成功.该细胞系构建为猪CYP3A29 基因的分子功能研究提供了可能.
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