观察节律基因BMAL1对人软骨细胞中胰岛素样生长因子1(IGF-1)信号的调控作用。
方法人膝关节软骨细胞随机分为对照组、IGF-1组(100 ng/ml，12 h)、si-control＋IGF-1组、si-BMAL1＋IGF-1组、AG-1024组。IGF-1处理之前，si-control＋IGF-1组和si-BMAL1＋IGF-1组细胞分别先转染对照和靶向BMAL1的短发卡RNA(shRNA)慢病毒载体，AG-1024组细胞添加10 nmol/L AG-1024预处理12 h。噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活，流式细胞术检测细胞凋亡，Western blot法检测BMAL1等蛋白的表达。
结果处理24 h后，IGF-1组和si-control＋IGF-1组细胞活性高于对照组(0.293±0.018比0.248±0.018，P＝0.000；0.285±0.015比0.248±0.018，P＝0.000)，AG-1024组则降低(0.182±0.009比0.248±0.018，P＝0.000)；48 h和72 h后，IGF-1组和si-control＋IGF-1组细胞活性高于对照组(48 h：0.422±0.023比0.342±0.027，P＝0.000；0.405±0.026比0.342±0.027，P＝0.000；72 h：0.508±0.029比0.411±0.026，P＝0.000；0.506±0.025比0.411±0.026，P＝0.000)，si-BMAL1＋IGF-1组和AG-1024组则低于对照组(48 h：0.284±0.017比0.342±0.027，P＝0.000；0.224±0.015比0.342±0.027，P＝0.000，72 h：0.326±0.022比0.411±0.026，P＝0.000；0.273±0.013比0.411±0.026，P＝0.000)IGF-1组和si-control＋IGF-1组细胞凋亡率低于对照组[(4.5±0.6)%比(7.0±1.0)%，P＝0.000；(5.1±1.1)%比(7.0±1.0)%，P＝0.006]，si-BMAL1＋IGF-1组和AG-1024组则升高[(13.4±1.4)%比(7.0±1.0)%，P＝0.000；(14.7±1.1)%比(7.0±1.0)%，P＝0.000]。相比于对照组，IGF-1组和si-control＋IGF-1组磷酸化IGF受体(p-IGF-1R)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)、Ⅱ型胶原蛋白(COLⅡ)、蛋白聚糖(ACAN)表达增加(IGF-1组：2.03±0.12比1.00±0.06，P＝0.000；1.71±0.11比1.00±0.07，P＝0.000；1.54±0.10比1.00±0.05，P＝0.000；1.96±0.11比1.00±0.05，P＝0.000；2.12±0.16比1.00±0.04，P＝0.000；si-control＋IGF-1组：1.95±0.06比1.00±0.06，P＝0.000；1.65±0.12比1.00±0.07，P＝0.000；1.52±0.11比1.00±0.05，P＝0.000；1.91±0.11比1.00±0.05，P＝0.000；2.06±0.13比1.00±0.04，P＝0.000)，AG-1024组则表达减少(0.73±0.06比1.00±0.06，P＝0.000；0.77±0.04比1.00±0.07，P＝0.000；0.75±0.06比1.00±0.05，P＝0.000；0.72±0.05比1.00±0.05，P＝0.000；0.82±0.06比1.00±0.04，P＝0.000)；si-BMAL1＋IGF-1组BMAL1、p-Akt、p-ERK、COLⅡ、ACAN表达减少(0.37±0.04比1.00±0.06，P＝0.000；0.88±0.09比1.00±0.07，P＝0.015；0.82±0.04比1.00±0.05，P＝0.001；0.78±0.04比1.00±0.05，P＝0.000；0.85±0.07比1.00±0.04，P＝0.003)。
结论沉默BMAL1的表达影响人软骨细胞存活、凋亡以及细胞内IGF-1信号传导。