人巨细胞病毒gp52蛋白与pp65蛋白融合表达及初步应用

来源 :中国微生物学会医学微生物的感染与免疫学术会议 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jin_sarah
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建立以重组表达HCMV蛋白为抗原的检测试剂盒,提高试剂盒的敏感性及特异性。从病毒及质粒中分别扩增gp52(281 ̄433aa,f〈,1〉)及pp65(361 ̄473aa,f〈,2〉)2个片段,以不同酶切位点同时插入到pTrcHisB载体上,筛选正确的重组质粒并在大肠杆菌中诱导表达。表达蛋白rp〈’52 ̄65〉占菌体总蛋白的30℅,以包涵体的形式存在,分子量为35000。以金属螯合亲和层析(IMAC)及分子筛方法纯化表达蛋白,纯度达到96℅,得率为22.9℅。以间接法检测HCMVIgM阳性血清,敏感性达到90.4℅(19/21)。融合蛋白具有良好的抗原性,可代替gp52及pp65作为HCMV IgM抗体检测试剂盒的包被抗原。
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