【摘 要】
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目的观察幽门螺杆菌感染人胃上皮细胞后自噬的发生及变化情况,为进一步研究幽门螺杆菌感染后诱发自噬反应的相关研究奠定基础。方法采用中性红摄入法确定H.pylori感染GES-1细
【机 构】
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四川大学华西第二医院儿科发育与妇儿疾病四川省重点实验室
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目的观察幽门螺杆菌感染人胃上皮细胞后自噬的发生及变化情况,为进一步研究幽门螺杆菌感染后诱发自噬反应的相关研究奠定基础。方法采用中性红摄入法确定H.pylori感染GES-1细胞的浓度,并以此浓度感染GES-1细胞不同时间。通过Western blot检测感染不同时间点GES-1中LC3I/II或P62蛋白表达,免疫荧光染色观察自噬体的出现。在使用自噬抑制剂3MA、E64d、pepstatin A处理被感染的GES-1后,利用上述方法监测细胞自噬变化情况。结果 H.pylori(22695)感染GES-1细胞最佳浓度为m.o.i=400。在GES-1细胞被感染后2 h即可观察到自噬的发生,且呈时间依赖性,于8 h到达高峰,24 h开始恢复基础水平。使用3MA处理细胞后自噬水平降低,自噬体明显减少。使用E64d和pepstatin A阻断被感染细胞中自噬溶酶体的形成,LC3I/II与P62蛋白因无法通过自噬途径降解而较未处理组增加。结论 H.pylori(22695)能够诱导人胃上皮(GES-1)发生自噬,且能被自噬调节剂调控。
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