【摘 要】
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目的 观察和分析A20基因转染对大鼠肾脏缺血再灌注后诱发的肾小管损伤及凋亡的影响.方法 通过构建人源的A20基因表达载体pcDNA3.1-A20及空质粒载体pcDNA3.1,并将其表达载体及pcDNA3.1空质粒载体转化到感受态大肠杆菌.对该大肠杆菌进行培养,并提取质粒DNA进行10％琼脂糖凝胶电泳分析,以确定其是目的基因.雄性SD大鼠24只,通过手术方法制成大鼠肾脏缺血再灌注模型,随机分为3组:
【机 构】
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目的 观察和分析A20基因转染对大鼠肾脏缺血再灌注后诱发的肾小管损伤及凋亡的影响.方法 通过构建人源的A20基因表达载体pcDNA3.1-A20及空质粒载体pcDNA3.1,并将其表达载体及pcDNA3.1空质粒载体转化到感受态大肠杆菌.对该大肠杆菌进行培养,并提取质粒DNA进行10％琼脂糖凝胶电泳分析,以确定其是目的基因.雄性SD大鼠24只,通过手术方法制成大鼠肾脏缺血再灌注模型,随机分为3组:生理盐水组、A20组、空质粒组,每组8只大鼠.术前48h,分别注射生理盐水、脂质体pcD-NA3.1-A20+生理盐水至250uL(15uL脂质体加10ug构建的质粒DNA混匀后加入生理盐水至250uL)、脂质体-pcDNA3.1+生理盐水至250uL(方法同上),混匀室温静置30min,分别通过大鼠尾静脉注射.术后24h收获大鼠,采用全自动生化分析仪检测肾功能,肾组织HE染色行病理学检测,TUNEL法检测肾组织细胞凋亡的情况.结果 A20组Scr、BUN水平明显低于空质粒组和生理盐水组(P＜0.05),差异有统计学意义.各组肾小管都有不同程度的损伤,A20组与生理盐水组及空质粒组比较,肾小管扩张,肾小管上皮细胞刷状缘脱落、坏死,蛋白管型等肾脏组织病理损伤明显减轻(P＜0.05),差异有统计学意义；空质粒组与生理盐水组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).肾小管上皮细胞凋亡多见于远端小管,A20组与生理盐水组和空质粒组比较,凋亡细胞数明显减少,差异有统计学意义(P＜0.05)；生理盐水组和空质粒组比较无显著性差异(P＞0.05).结论 A20基因转染能明显减轻肾脏缺血再灌注损伤,其机制可能与抑制肾小管上皮细胞凋亡有关。
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