【摘 要】
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目的:探讨Orai1对鼻咽癌细胞侵袭和上皮-间充质转化的影响及其作用机制.方法:培养鼻咽上皮细胞NP69和4种鼻咽癌细胞系(CNE1、CNE2、HONE1和5-8F),分别采用实时荧光定量PCR(qPCR)和Western blot法检测细胞中Orai1的mRNA和蛋白表达水平.采用靶向Orai1的短发夹RNA(shRNA)质粒,转染CNE2细胞,设转染对照质粒的CNE2细胞为阴性对照组,钙离子成像检测钙库调节的钙离子内流,Transwell小室检测细胞转移和侵袭,qPCR和Western blot法检测
【机 构】
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深圳市龙岗区耳鼻咽喉医院耳鼻咽喉科/深圳市耳鼻咽喉研究所,广东 深圳 518172
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目的:探讨Orai1对鼻咽癌细胞侵袭和上皮-间充质转化的影响及其作用机制.方法:培养鼻咽上皮细胞NP69和4种鼻咽癌细胞系(CNE1、CNE2、HONE1和5-8F),分别采用实时荧光定量PCR(qPCR)和Western blot法检测细胞中Orai1的mRNA和蛋白表达水平.采用靶向Orai1的短发夹RNA(shRNA)质粒,转染CNE2细胞,设转染对照质粒的CNE2细胞为阴性对照组,钙离子成像检测钙库调节的钙离子内流,Transwell小室检测细胞转移和侵袭,qPCR和Western blot法检测上皮-间充质转化(EMT)标志物E钙黏蛋白(E-cadherin)、N钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的mRNA和蛋白表达水平.结果:NP69、CNE1、CNE2、HONE1和5-8F细胞中均表达Orai1,且CNE2细胞中表达相对较高,故选择CNE2细胞进行后续试验.与阴性对照组相比,转染Orai1 shRNA后,CNE2细胞中Orai1的mRNA和蛋白水平均显著降低(P<0.05);CNE2细胞的钙库调节钙离子内流能力、转移/侵袭能力和EMT相关标志蛋白E-cadherin、N-cadherin和Vimentin的mRNA和蛋白表达水平均显著下降(P<0.05).结论:抑制Orai1表达可抑制鼻咽癌细胞钙库调节钙离子内流、转移侵袭和EMT进程,提示Orai1可能成为治疗鼻咽癌转移的新靶标和新方向.
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