【摘 要】
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利用PCR方法从银狐大肠杆菌基因组中克隆出htra基因,测序无误后将其构建到pET32a原核表达载体上,重组载体转化BL21大肠杆菌诱导重组蛋白表达,通过SDS-PAGE和Western blot方法
【机 构】
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河北科技师范学院河北省预防兽医学重点实验室; 秦皇岛第二医院;
【基金项目】
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国家“星火计划”资助项目(2015GA620002);河北省科技厅“科技支撑计划”资助项目(14826613D);河北科技师范学院博士启动基金资助项目(2015YB002);河北省高等学校科学技术研究资助项目(ZD2016067);秦皇岛市农业科学研究院资助项目(2014-04)
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利用PCR方法从银狐大肠杆菌基因组中克隆出htra基因,测序无误后将其构建到pET32a原核表达载体上,重组载体转化BL21大肠杆菌诱导重组蛋白表达,通过SDS-PAGE和Western blot方法验证重组蛋白得到很好表达;用亲和层析方法纯化蛋白,纯化的蛋白免疫小鼠,所得的多抗血清能够特异性识别大肠杆菌HtrA蛋白,为研究HtrA蛋白的作用机制奠定基础。
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