【摘 要】
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目的探讨激光扫描共聚焦显微镜(CLSM)检测核因子κB(NF-κB)的方法.方法用肿瘤坏死因子α(TNF-α)刺激PC12细胞活化,间接免疫荧光(FITC)标记代表的P65亚基,碘化丙啶(PI)标记
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目的探讨激光扫描共聚焦显微镜(CLSM)检测核因子κB(NF-κB)的方法.方法用肿瘤坏死因子α(TNF-α)刺激PC12细胞活化,间接免疫荧光(FITC)标记代表的P65亚基,碘化丙啶(PI)标记细胞DNA指示核区,用CLSM对进行定位显示和定量分析,以Western Blot检测结果作为对照标准.结果TNF-α刺激后PC12细胞经CLSM显示:核区内出现代表的绿色荧光,其核区与胞浆区比值(FN/FC)明显大于未经TNF-α刺激的PC12细胞;而未经刺激的PC12细胞红色的核区内未出现绿色荧光.Western Blot显示TNF-α刺激后PC12细胞核提取物呈阳性反应,即出现代表蛋白的条带,未经TNF-α刺激的PC12细胞核提取物呈阴性反应,即核提取物中未出现代表NF-κB/p65蛋白的条带,CLSM检测与Western Blot检测结果一致.结论CLSM检测既可定位显示,又可定量分析,能显示单个细胞的NF-κB状态,且具有同时显示细胞形态等优点,是研究细胞核因子的有效方法.
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