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【摘要】 目的 探讨不同方法学及试剂检测乙型肝炎血清标志物的一致性。方法 选取笔者所在医院经罗氏ECLIA检测证实的100例乙型肝炎病毒（HBV）感染者以及50例健康体检者的血清，选用ELISA、TRFIA和ECLIA三种方法对乙型肝炎血清标志物进行检测。结果 在检测乙型肝炎血清标志物方面三种方法的结果具有高度以上的一致性，且ECLIA法在检测中敏感性最高。结论 当前实验室使用的乙型肝炎血清标志物检测方法均具有较高的一致性，有利于实验室之间进行结果互认。
【关键词】 乙型肝炎； 血清标志物； 检测； 评价
当前我国乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）的携带率约为10%左右，临床上用于乙型肝炎病毒血清免疫学标志物（HBV-M）检测的方法很多，国内传统检测手段主要使用酶联免疫吸附法（ELISA），近年来诸如时间分辨荧光分析法（TRFIA）、微粒子酶免疫分析法（MEIA）以及电化学发光法（ECLIA）等新式检测手段也逐渐应用于实验室检测中。本次试验选用ELISA、TRFIA和ECLIA三种方法对乙型肝炎血清标志物进行检测，旨在对不同方法学检测结果之间的一致性进行评价。
1 资料与方法
1.1 研究对象 选取笔者所在医院经罗氏ECLIA检测证实的100例乙型肝炎病毒（HBV）感染者的血清，患者均符合慢性乙型肝炎诊断标准［1］，其中男65例，女35例；年龄16～50岁；另选取50例健康体检者的血清。
1.2 方法
1.2.1 仪器试剂 ELISA检测选用ALISEI全自动酶标仪（意大利）以及科华生物试剂盒（上海）；TRFIA检测选用WALLAC DELFIA-1235时间分辨免疫荧光分析仪（芬兰）和新波生物试剂盒（上海）；ECLIA检测选用罗氏E601电化学发光免疫分析仪（德国）及其标准配置试剂。
1.2.2 检测方法 检测操作均按照仪器操作说明书以及试剂盒说明书进行。本组待检血清样本均用3种方法进行检测，每次检测时均带阴、阳性质控（质控来源为上海市临床检验中心以及罗氏公司）。检测结果的判定以试剂说明书中规定的Cut-off值作为标准，应用夹心法检测时，结果大于Cut-off值为阳性；应用竞争法检测时，结果小于Cut-off值为阳性。
1.3 统计学方法 不同检测方法结果的一致性采用Kappa检验，一致性的强弱程度按照Landis以及Koch参照Kappa系数的大小进行判断，共分为6个区段，Kappa系数小于0时为极差；0～0.2为微弱；0.21～0.4为弱，0.41～0.6为中度；0.61～0.8为高度；0.81～1.0为极强［2］；抽样误差的排除应用μ检验。
2 结果
2.1 使用ELISA法与ECLIA法检测乙型肝炎血清标志物结果比较 见表1。
2.2 使用TRFIA法与ECLIA法检测乙型肝炎血清标志物结果比较 见表2。
3 讨论
当前实验室对乙型肝炎血清标志物的检测方法中，ELISA法适用于定性检测，TRFIA、ECLIA等适用于定量检测，由于不同实验室在应用这些方法时的溯源性以及采用的单位各不相同，因此结果相差较大，给患者的就诊以及临床医生对报告结果的正确解读造成了不便，基于此，不同方法学检测结果之间的相关性评价就显得十分必要。本次研究所选用的3种检测方法中，ECLIA法是当前特异性和敏感性最好的检测方法，故将其检测结果与其他方法进行比较，以评价不同方法学检测结果之间的一致性。
根据本次研究结果显示，ELISA法和ECLIA法在HBeAg项目上显示极强一致性，剩余4项均为高度一致性，显示ELISA法在临床应用中检测率良好［3］，但HBsAg项目上有8例漏诊，提示该法在敏感性方面尚有不足，在血站以及手术等对结果极为敏感的情况下不适合应用此法，但是ELISA法试剂成本较低，因此适用于普通人群筛查或者经济状况较差的患者。TRFIA法与ECLIA法检测结果在HBsAg、HBeAg、抗HBe以及抗HBc这4个项目上具有极强的一致性，在抗HBs项目上具有高度一致性，这一结果亦与国内文献［4］报道基本一致。
综上所述，酶联免疫吸附法（ELISA）、时间分辨荧光分析法（TRFIA）以及电化学发光法（ECLIA）三种方法在乙型肝炎血清标志物检测方面一致性较高，有利于实验室之间进行结果互认。
参 考 文 献
［1］ 中华医学会传染病与寄生虫病学分会、肝病学分会.病毒性肝炎防治方案.中华肝脏病杂志，2010,（8）：324-329.
［2］ 夏邦世.时间分辨免疫荧光技术检测HBV血清标志物临床应用评价.临床医学，2006，33（3）：6-7.
［3］ 周迎春，陈辉，关平，等.3种方法测定低浓度乙型肝炎病毒表面抗原效果评价.检验医学与临床，2007，4（11）：1070-1071.
［4］ 陈佑明，黄敬，熊符，等.时间分辨荧光免疫分析法和免疫放射分析法检测HBsAg的对比分析.标记免疫分析与临床，2006，13（1）：50-51.
（收稿日期：2011-05-23）
（本文编辑：郎威）
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表1 ELISA法与ECLIA法检测乙型肝炎血清标志物结果比较
注：所有项目P<0.05，两种检测方法具有一致性
表2 TRFIA法与ECLIA法检测乙型肝炎血清标志物结果比较
注：所有项目P<0.05，两种检测方法具有一致性
【关键词】 乙型肝炎； 血清标志物； 检测； 评价
当前我国乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）的携带率约为10%左右，临床上用于乙型肝炎病毒血清免疫学标志物（HBV-M）检测的方法很多，国内传统检测手段主要使用酶联免疫吸附法（ELISA），近年来诸如时间分辨荧光分析法（TRFIA）、微粒子酶免疫分析法（MEIA）以及电化学发光法（ECLIA）等新式检测手段也逐渐应用于实验室检测中。本次试验选用ELISA、TRFIA和ECLIA三种方法对乙型肝炎血清标志物进行检测，旨在对不同方法学检测结果之间的一致性进行评价。
1 资料与方法
1.1 研究对象 选取笔者所在医院经罗氏ECLIA检测证实的100例乙型肝炎病毒（HBV）感染者的血清，患者均符合慢性乙型肝炎诊断标准［1］，其中男65例，女35例；年龄16～50岁；另选取50例健康体检者的血清。
1.2 方法
1.2.1 仪器试剂 ELISA检测选用ALISEI全自动酶标仪（意大利）以及科华生物试剂盒（上海）；TRFIA检测选用WALLAC DELFIA-1235时间分辨免疫荧光分析仪（芬兰）和新波生物试剂盒（上海）；ECLIA检测选用罗氏E601电化学发光免疫分析仪（德国）及其标准配置试剂。
1.2.2 检测方法 检测操作均按照仪器操作说明书以及试剂盒说明书进行。本组待检血清样本均用3种方法进行检测，每次检测时均带阴、阳性质控（质控来源为上海市临床检验中心以及罗氏公司）。检测结果的判定以试剂说明书中规定的Cut-off值作为标准，应用夹心法检测时，结果大于Cut-off值为阳性；应用竞争法检测时，结果小于Cut-off值为阳性。
1.3 统计学方法 不同检测方法结果的一致性采用Kappa检验，一致性的强弱程度按照Landis以及Koch参照Kappa系数的大小进行判断，共分为6个区段，Kappa系数小于0时为极差；0～0.2为微弱；0.21～0.4为弱，0.41～0.6为中度；0.61～0.8为高度；0.81～1.0为极强［2］；抽样误差的排除应用μ检验。
2 结果
2.1 使用ELISA法与ECLIA法检测乙型肝炎血清标志物结果比较 见表1。
2.2 使用TRFIA法与ECLIA法检测乙型肝炎血清标志物结果比较 见表2。
3 讨论
当前实验室对乙型肝炎血清标志物的检测方法中，ELISA法适用于定性检测，TRFIA、ECLIA等适用于定量检测，由于不同实验室在应用这些方法时的溯源性以及采用的单位各不相同，因此结果相差较大，给患者的就诊以及临床医生对报告结果的正确解读造成了不便，基于此，不同方法学检测结果之间的相关性评价就显得十分必要。本次研究所选用的3种检测方法中，ECLIA法是当前特异性和敏感性最好的检测方法，故将其检测结果与其他方法进行比较，以评价不同方法学检测结果之间的一致性。
根据本次研究结果显示，ELISA法和ECLIA法在HBeAg项目上显示极强一致性，剩余4项均为高度一致性，显示ELISA法在临床应用中检测率良好［3］，但HBsAg项目上有8例漏诊，提示该法在敏感性方面尚有不足，在血站以及手术等对结果极为敏感的情况下不适合应用此法，但是ELISA法试剂成本较低，因此适用于普通人群筛查或者经济状况较差的患者。TRFIA法与ECLIA法检测结果在HBsAg、HBeAg、抗HBe以及抗HBc这4个项目上具有极强的一致性，在抗HBs项目上具有高度一致性，这一结果亦与国内文献［4］报道基本一致。
综上所述，酶联免疫吸附法（ELISA）、时间分辨荧光分析法（TRFIA）以及电化学发光法（ECLIA）三种方法在乙型肝炎血清标志物检测方面一致性较高，有利于实验室之间进行结果互认。
参 考 文 献
［1］ 中华医学会传染病与寄生虫病学分会、肝病学分会.病毒性肝炎防治方案.中华肝脏病杂志，2010,（8）：324-329.
［2］ 夏邦世.时间分辨免疫荧光技术检测HBV血清标志物临床应用评价.临床医学，2006，33（3）：6-7.
［3］ 周迎春，陈辉，关平，等.3种方法测定低浓度乙型肝炎病毒表面抗原效果评价.检验医学与临床，2007，4（11）：1070-1071.
［4］ 陈佑明，黄敬，熊符，等.时间分辨荧光免疫分析法和免疫放射分析法检测HBsAg的对比分析.标记免疫分析与临床，2006，13（1）：50-51.
（收稿日期：2011-05-23）
（本文编辑：郎威）
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表1 ELISA法与ECLIA法检测乙型肝炎血清标志物结果比较
注：所有项目P<0.05，两种检测方法具有一致性
表2 TRFIA法与ECLIA法检测乙型肝炎血清标志物结果比较
注：所有项目P<0.05，两种检测方法具有一致性