【摘 要】
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【目的】利用分子生物学实验研究鼠疫菌调控子OxyR对dps的转录调控机制。【方法】提取鼠疫菌野生株(WT)和oxyR突变株(ΔoxyR)的总RNA,采用引物延伸实验研究dps的转录起始位点
【机 构】
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江苏大学基础医学与医学技术学院; 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室;
【基金项目】
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病原微生物生物安全国家重点实验室开放研究基金资助项目(SKLPBS1112);江苏大学高级专业人才科研启动基金项目(10JDG044);江苏省高校自然科学研究项目(12KJD310001)~~
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【目的】利用分子生物学实验研究鼠疫菌调控子OxyR对dps的转录调控机制。【方法】提取鼠疫菌野生株(WT)和oxyR突变株(ΔoxyR)的总RNA,采用引物延伸实验研究dps的转录起始位点,并根据产物的丰度判断OxyR对dps的调控关系。进一步采用实时定量RT-PCR的方法验证OxyR对dps的调控关系。PCR扩增dps的整个启动子区DNA序列,并纯化His-OxyR蛋白,通过凝胶阻滞实验(EMSA)验证OxyR对dps启动子区是否具有直接的相互作用。利用大肠杆菌OxyR识别基序,预测鼠疫菌OxyR对dps启动子区的结合位点,从而得出鼠疫菌OxyR对dps的转录调控机制。【结果】鼠疫菌dps有一个转录起始位点G(-40)(翻译起始位点为+1),其转录表达受OxyR的激活;体外实验及生物信息学预测结果表明OxyR能结合到dps启动子区-111到-78之间的碱基上。【结论】OxyR能直接结合到dps启动子区而激活其转录表达。
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