【摘 要】
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目的:建立生物素一亲和素系统酶呈色方法用于DNA芯片检测乙型肝炎病毒基因多态性及临床应用.方法:针对HBVDNA多个常见点突变位点,设计多条寡核苷酸探针,用点样仪将其固定于硅
【机 构】
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南通医学院附属医院检验科,盐城市第一人民医院,中国科学院上海微系统与信息技术研究所,南通市第三人民医院
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目的:建立生物素一亲和素系统酶呈色方法用于DNA芯片检测乙型肝炎病毒基因多态性及临床应用.方法:针对HBVDNA多个常见点突变位点,设计多条寡核苷酸探针,用点样仪将其固定于硅烷化芯片的特定位置上,经与PCR扩增的HBV基因相应区段杂交,杂交结果影印至硝酸纤维素膜,经BCIP/NBT避光显色,根据特定位置上杂交信号的有无和与之相应的探针序列来判定基因突变的类型.结果:通过一次杂交反应可检测HBV前C/C区(nt1896/1814)、BCP区(nt1762/1764)和P区(aa528/552)等多个位点的变异,与测序分析结果符合率97%,具有较好的检测灵敏度和重复性.156例乙肝患者HBV基因前C/C及BCP区检出基因突变70例(阳性率44.9%),在127例慢性肝炎组检出突变60例(47.2%)、22例肝炎硬化组检出突变8例(36.4%).结论:酶呈色法DNA芯片检测HBV基因常见突变位点多态性,操作简便易行,节省昂贵试剂与设备,具有临床推广应用价值.
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