新城疫病毒基因型差异性单克隆抗体的制备及鉴定

来源 :中国家禽 | 被引量 : 0次 | 上传用户:b110701007
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目前新城疫病毒(NDV)弱毒株的混杂对禽病实验室病原诊断工作造成很大困扰,NDV强弱毒株以及基因型的快速鉴别是亟待解决的重要问题.研究选用一株与疫苗株La Sota存在显著抗原性差异的强毒株PI/C HINA/SD/2012/167制备油乳剂疫苗免疫小鼠制备单克隆抗体.采用间接ELISA检测抗体对该强毒株及La Sota株的反应性,筛选广谱型和强弱毒株差异型的单克隆抗体,最终获得2株存在基因型差异的单克隆抗体.其中,3F10株不与Class Ⅰ以及ClassⅡ基因Ⅰ型毒株反应,而与其他毒株都有很好的反应性,而7E11株不仅与Class Ⅰ以及ClassⅡ基因Ⅰ型毒株反应性弱,而且与La Sota株和Mukteswar株的反应性也远远低于Class Ⅰ基因Ⅵ、Ⅶ和Ⅸ型的强毒株.为了确定两株克隆抗体靶向的病毒蛋白,构建了NDV蛋白真核表达质粒转染DF1细胞,并利用Western blot和间接免疫荧光试验进行检测.结果显示,3F10针对NDV M蛋白,而7E11针对NDV F蛋白.两株单克隆抗体与NDV不同基因型毒株反应的差异性为NDV的鉴别诊断技术研究奠定了基础.
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