【摘 要】
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目的 利用环媒恒温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP),建立检测原型泡沫病毒(prototype foamy virus,PFV)的方法.方法 根据PFV的整合酶核心区基因序列
【机 构】
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南开大学生命科学学院,教育部分子微生物与技术重点实验室,微生物功能基因组与检测技术教育部工程研究中心,天津,300071天津市临床检验中心,天津市第一中心医院,300192;
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目的 利用环媒恒温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP),建立检测原型泡沫病毒(prototype foamy virus,PFV)的方法.方法 根据PFV的整合酶核心区基因序列设计了3对LAMP引物,利用有链取代活性的Bst DNA聚合酶在63℃对靶序列进行扩增.优化检测条件,建立PFV的检测方法.结果 以含目的片段的质粒为模板建立了PFV的检测方法,运用此方法可特异地检测出PFV,而人免疫缺陷病毒、牛免疫缺陷病毒、牛泡沫病毒检测均为阴性,检测灵敏度为50拷贝,较聚合酶链反应高一个数量级.系统可以在15 min内完成扩增,同时可以在细胞基因组干扰下检出病毒,对混有病毒基因的人外周血单个核细胞(PBMC)总DNA的检测呈现特异阳性反应.结论 建立基于PFV整合酶基因的LAMP检测方法,在PFV感染检测方面有应用前景.
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