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目的
分析田鼠巴贝虫可溶性抗原蛋白组分,寻找敏感、特异的诊断候选抗原。
方法用田鼠巴贝虫感染BALB/c小鼠,待红细胞感染率达到高峰时(感染率> 70%),收集虫体,制备可溶性抗原;同时收集BALB/c小鼠的本底血清和感染田鼠巴贝虫7、14、21、28、35、42、49和56 d后的血清;聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)分析可溶性抗原的蛋白组分,蛋白质免疫印迹法(Western blot)分析可溶性抗原的免疫反应性,选择阳性反应条带进行质谱鉴定和序列分析。
结果可溶性抗原经SDS-PAGE分析,可观察到9条主带和12条次带,蛋白条带的相对分子质量(Mr)介于(12~185)× 103(kDa);Western blot结果显示感染后7 d的混合鼠血清可识别Mr为40和45 kDa的蛋白条带且反应较强,感染后14 d的混合鼠血清可识别Mr为40、45、54和95 kDa的蛋白条带,感染后21 d的混合鼠血清可识别Mr为27、40、45、54、95和110 kDa的蛋白条带,感染后28 d至感染56 d的混合鼠血清均可识别Mr为27、40、45、54、95和110 kDa的蛋白条带且随着感染时间的延长出现其他的弱反应条带。阳性反应条带通过质谱鉴定和序列分析,共确定336个蛋白,包括表面抗原、热休克蛋白70、血清反应抗原、含t-复合物多肽伴侣蛋白的Eta亚基1和未命名蛋白。
结论田鼠巴贝虫可溶性抗原中Mr为40、45、54 kDa的组分是较好的诊断候选抗原,在田鼠巴贝虫病诊断中的应用前景值得进一步研究。