目的 探讨丹参酚酸B盐(Sal B)对内皮素-1(ET-1)诱导的大鼠肝星状细胞(HSC)收缩以及对细胞骨架的影响.方法 采用肝脏原位灌流酶消化法、Nycodenz密度梯度离心法分离大鼠HSC.培养细胞分为对照组、ET-1组、SalB组和Y-27632组.ET-1组细胞予以10-8 mol/L ET-1刺激,SalB组或Y-27632组细胞在ET-1刺激前分别予以10-5 mol/L Sal B或105 mol/L Y-27632预处理30 min.用胶原凝胶收缩法观察HSC收缩情况.用甘油胶电泳和Odyssey荧光成像系统检测肌球蛋白轻链2 (MLC2)的磷酸化水平.用FITC-鬼笔环肽特异性染肌动蛋白丝,观察Sal B对HSC中肌动蛋白骨架的影响.两组间比较用t检验,多组间比较用方差分析,Q检验. 结果 对照组凝胶面积为76.89%±3.84%,ET-1组凝胶与对照组相比明显收缩,面积为37.10%±5.10%(q=25.51,P< 0.01).104mol/L Sal B或10-5 mol/L Y-27632预处理能显著抑制HSC收缩,凝胶面积分别为67.01%±4.14%和77.28%±2.00%,与ET-1组相比,q值分别为16.97、25.76,P值均<0.01,差异均有统计学意义.在基础状态下MLC2磷酸化水平为(0.35±0.05) mol PO4/mol MLC2; ET-1刺激后,MLC2磷酸化水平迅速上升,在ET-1刺激5min时为(0.87±0.04) molPO4/mol MLC2,30min时达到高峰[(0.96±0.04)mol POJmol MLC2].SalB能显著抑制ET-1诱导的MLC2磷酸化,可使ET-1刺激30min时MLC2磷酸化水平下降63.1%(q=26.67,P<0.01),并且使肌动蛋白丝解聚,细胞骨架松弛. 结论 Sal B能有效抑制ET-1诱导的大鼠HSC收缩.这种效应是基于SalB抑制ET-1诱导的MLC2磷酸化以及抑制HSC中肌动蛋白纤维的聚合。
丹参酚酸B盐对大鼠肝星状细胞收缩以及对细胞骨架的影响
【摘 要】
:
目的 探讨丹参酚酸B盐(Sal B)对内皮素-1(ET-1)诱导的大鼠肝星状细胞(HSC)收缩以及对细胞骨架的影响.方法 采用肝脏原位灌流酶消化法、Nycodenz密度梯度离心法分离大鼠HSC.培养细胞分为对照组、ET-1组、SalB组和Y-27632组.ET-1组细胞予以10-8 mol/L ET-1刺激,SalB组或Y-27632组细胞在ET-1刺激前分别予以10-5 mol/L Sal B或
【机 构】
:
201203上海中医药大学附属曙光医院,上海中医药大学肝病研究所,201203上海中医药大学附属曙光医院,上海中医药大学肝病研究所,201203上海中医药大学附属曙光医院,肝肾疾病病证教育部重点实验室
【出 处】
:
中华肝脏病杂志
【发表日期】
:
2014年22期
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