【摘 要】
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为建立一种快速、简便、灵敏的检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的胶体金免疫层析方法(GICA),本研究采用柠檬酸三钠还原法制备了胶体金颗粒,标记抗PRRSV N蛋白的单克隆抗体
【机 构】
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中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室; 中国农业科学院上海兽医研究所; 齐鲁动物保健品有限公司;
【基金项目】
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国家国际科技合作项目(2010DFB33920)
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为建立一种快速、简便、灵敏的检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的胶体金免疫层析方法(GICA),本研究采用柠檬酸三钠还原法制备了胶体金颗粒,标记抗PRRSV N蛋白的单克隆抗体(MAb)2D7制备免疫检测探针,将抗PRRSV N蛋白的MAb 1G7和羊抗鼠IgG抗体印迹在硝酸纤维素膜上,分别作为检测线和质控线,经条件优化,组装成胶体金免疫层析试纸条。本研究制备的PRRSV胶体金试纸条的最低检测限度为103.0 TCID50/mL;在特异性试验中,试纸条检测PRRSV呈阳性,其它主要猪病病原均为阴性;不同批次试纸条重复检测,结果无差异;对现地猪场送检的150份病料进行PRRSV病原检测,与RT-PCR相比较,试纸条的特异性和敏感性分别为98.13%和88.37%。两种方法的一致性Kappa值为0.882。建立的PRRSV抗原胶体金免疫层析检测方法具有良好的的敏感性、特异性、重复性及现地应用性。该试纸条的研制为PRRS的快速诊断及免疫预防提供了技术手段。
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