【摘 要】
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目的研究RNA干扰沉默Aurora-A基因后对喉癌Hep-2细胞体外体内生长的抑制作用.方法构建靶向Aurora-A的小干扰RNA（siRNA）表达质粒并转染喉鳞癌Hep-2细胞株,采用CCK-8实验、Transwell实验、软琼脂克隆形成实验和裸鼠体内接种观察Aurora-A沉默后Hep-2细胞的增殖、侵袭和克隆形成能力以及体内肿瘤生长情况,Western blot和免疫组化检测参与细胞黏附侵袭
【机 构】
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上海交通大学医学院附属瑞金医院耳鼻咽喉科,上海200025,上海消化道肿瘤重点实验室,上海交通大学医学院附属瑞金医院耳鼻咽喉科,上海200025,上海交通大学医学院附属瑞金医院耳鼻咽喉科,上海2000
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目的研究RNA干扰沉默Aurora-A基因后对喉癌Hep-2细胞体外体内生长的抑制作用.
方法构建靶向Aurora-A的小干扰RNA（siRNA）表达质粒并转染喉鳞癌Hep-2细胞株,采用CCK-8实验、Transwell实验、软琼脂克隆形成实验和裸鼠体内接种观察Aurora-A沉默后Hep-2细胞的增殖、侵袭和克隆形成能力以及体内肿瘤生长情况,Western blot和免疫组化检测参与细胞黏附侵袭的重要因子黏着斑激酶和基质金属蛋白酶-2的表达情况.
结果Hep-2细胞转染Aurora-A siRNA 后,siRNA-3实验组的Aurora-A蛋白的表达下降了52%,CCK-8实验中siRNA-3组细胞的平均（x±s）吸光度值为（3.268±0.106）,低于Hep-2细胞组的（3.722 ±0.152）,差异有统计学意义（F=17.634,P＜0.01）；Transwell实验显示,siRNA-3组每个视野的平均侵袭细胞数目为（110.0±18.0）个,较Hep-2组的（236.0 ±26.0）个减少,两组差异有统计学意义（F=26.462,P＜0.01）；克隆形成实验中,siRNA-3组平均集落数目（31.0±6.6）个,低于Hep-2组平均细胞集落数目（104.0±14.0）个（F=75.321,P＜0.001）.接种后,体内移植瘤生长受到抑制,siRNA-3组的肿瘤平均体积为（127.77±174.83） mm3,低于Hep-2组的肿瘤平均体积（837.26±101.80） mm3（F=28.187,P＜0.001）.在体外和体内黏着斑激酶和基质金属蛋白酶-2的表达也下降.
结论抑制Aurora-A基因后,通过降低黏着斑激酶和基质金属蛋白酶-2的表达,抑制Hep-2细胞的生长,减弱肿瘤细胞的恶性侵袭性,Aurora-A可以成为喉鳞癌治疗良好的干预靶点.
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