胶质源性神经营养因子在人外周血白细胞中的表达

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胶质源性神经营养因子(GDNF)因最初在大鼠胶质细胞系B49细胞中发现而得名。GDNF显著的生物学功能是能促进多种神经元细胞的生长和分化,包括多巴胺能神经元、外周自主性神经元亚群和感觉神经元,中枢神经系统的运动神经元,去甲肾上腺素能神经元等。GDNF的组织分布比较广泛,在发育个体的脑组织包括海马、脑皮层和中脑及外周组织的皮肤、肾脏、胃、精囊、骨骼肌、卵巢、肺、肾上腺有一定程度的表达,在心脏、脾、胸腺、甲状腺、垂体和唾液腺检测到极低水平的GDNF mRNA。成年动物中,GDNF在小肠中的表达水平上升,而在其他组织中则逐渐下降,说明GDNF除对神经系统有作用外,对其他器官组织也有一定的作用。 目前所发现的许多神经营养因子如神经生长因子(NGF)、脑衍生神经营养因子(BDNF)等除对神经元细胞具有广泛的神经营养作用外,它们还具有比较广泛的生物学作用。目前对GDNF功能的研究仍集中在对神经元细胞作用方面。为了进一步探讨GDNF其他可能的生物学功能,本实验用RT-PCR方法初步探讨了GDNF在外周血白细胞、人脐血白细胞及人髓系白血病细胞系KG-1a中的表达。 实验中分别选用人外周血及人脐带血,从中分离白细胞,同时选用人髓系白血病细胞系KG-1a,分别提取3种来源细胞的总RNA,对提取的细胞总RNA用DNA酶消化,以确保样品中无基因组DNA污染。根据文献报道的GDNF cDNA序列设计如下引物:(1) 5′-AAATGTCACCAGATAAACAA-3′; (2) 5′-CGGGATCCTTAGATACATCCACACCT-3′。 以从3种细胞中提取的总RNA为模板,进行RT-PCR反应,同时,依据已知GDNFR-α的cDNA序列设计如下引物: A:5′-TCTAAAGGAAAACTACGC-3′;B:5′-CGGGATCCTGTGGTTATGTGGCTGGA-3′。检测KG-1a细胞对GDNF受体GDNFR-α的表达,并以MTT法初步探讨了外源性rhGDNF对KG-1a细胞生长的影响。 实验结果表明,在人外周血白细胞及人髓系白血病细胞KG-1a中检测到GDNF在mRNA水平上的表达,而人脐血白细胞则未见到GDNF在mRNA水平上的表达。由于本实验没有对外周血白细胞进行进一步的分离,具体何种细胞表达GDNF还不清楚。另外有文献报道,人髓系白血病细胞KG-1a表达GDNF受体成员的两个组分GDNFR-α和Ret,本实验又发现此细胞在mRNA水平上有GDNF的表达,因此推测GDNF对此细胞有一定的生物学作用,但是以本实验所采用的MTT法,没有观察到rhGDNF对KG-1a细胞有明显的促增殖或抑制生长的作用。究竟GDNF在 KG-1a细胞和人外周血白细胞中表达的意义何在,还需进一步的实验研究。
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